生脉饮中5-HMF来源机制及炮制对五味子中化学成分影响的研究

生脉饮中5-HMF来源机制及炮制对五味子中化学成分影响的研究

论文摘要

饮片入药,生熟异治是中医药有别于其它传统医药的重要标志,复方配伍与依法炮制是中医临床用药的显明特色之一。生脉饮作为我国著名的传统中药方剂之一,具益气生津、止渴止汗、“回阳救逆”之功效,由人参、麦冬和五味子三味药组成。北五味子是木兰科五味子属植物Schisandra Chinesisi(Turez.)Baill.的干燥成熟果实,性味酸、甘,温。入肺、心、肾经。具收敛固涩,益气生津,补肾宁心的功能。不同五味子炮制品功效不同,生品长于敛肺止咳,生津敛汗;醋制品可增强涩精止泻作用;酒制品能增强温补作用;蜜制品补肺益肾作用增强。本文简单介绍了生脉饮的研究概况、中药常见炮制方法和常用辅料,综述了五味子炮制历史沿革、炮制前后中药功效变化、五味子化学成分研究现状及五味子药理学功效研究进展。针对目前生脉饮中5-HMF来源机制不明确、五味子炮制过程中炮制黑润程度难以量化控制、炮制辅料用量不一、密闭程度未做统一规定及目前五味子质量评价指标单一等现状,结合五味子传统用药一般采用水煎剂、酊剂或丸散剂入药的实际状况,本论文验证了酸性环境和糖加入量对生脉饮中5-HMF产生的影响,并通过对五味子浸泡、煎煮和炮制来研究五味子中5-HMF的来源机制;提出了以生物学活性得到众多科研工作者认可的总木脂素、五味子乙素、水浸率、醇浸率及仍有争议的活性成分5-HMF含量作指标来探讨五味子炮制原理,为五味子炮制现代化提供理论依据和技术支持。具体内容包括生脉饮中5-HMF来源的研究、炮制对五味子外观性状及重量、对五味子中5-HMF含量、对五味子中五味子乙素含量及其溶出率、对五味子中总木脂素及其溶出率、对五味子醇浸率和水浸率的影响等。(1)生脉饮中5-HMF来源的研究建立了一种直接分析中药煎煮液中5-HMF含量的分析方法,避免了样品前处理过程中加热可能产生5-HMF的影响。色谱条件如下:Diamonsil C18柱(250×4.6mm,5μm),流动相为水-乙腈(95∶5=V/V),流速为1.0mL·min-1,柱温为25℃,检测波长为280 nm,进样量为1μl—10μl,检测时间20 min,5-HMF分离度>1.5,理论塔板数为>4000,峰对称性为0.96,样品中5-HMF精密度的RSD为0.71%,稳定性RSD为1.23%,重现性RSD为1.58%,平均加样回收率为98.89%,均符合我国药典对药物分析的要求。研究了无机酸模拟的五味子酸性环境对5-HMF产生的影响、改变果糖和葡萄糖的加入量模拟糖的改变、改变五味子加入量及五味子和麦冬共同煎煮与五味子单独煎煮时对5-HMF产生的影响,结果无机酸模拟的五味子相似的酸性环境产生的5-HMF量远低于五味子存在时产生的量,果糖和葡萄糖加入量改变并不能明显增加5-HMF的产生,5-HMF产生量和五味子加入量几乎呈线性关系,麦冬和五味子共同煎煮与五味子单独煎煮产生的5-HMF量基本无差异。生脉饮中的5-HMF主要来源于五味子而不是五味子和麦冬的配伍。研究了生五味子和不同炮制五味子饮片在浸泡和煎煮过程中5-HMF产生的情况,比较了五味子在煎煮和炮制过程产生5-HMF的差别,并研究了蜂蜜、葡萄糖和果糖与五味子共同炮制及在模拟煎煮、炮制条件下单独煎煮和炮制蜂蜜、葡萄糖、果糖后5-HMF产生的情况。结果浸提液和煎煮液中生五味子含极少量5-HMF,不同厂家炮制的五味子中5-HMF含量差别非常大。炮制和煎煮过程中五味子产生5-HMF量差别非常明显,五味子和糖共同炮制后5-HMF含量明显增加,醋制五味子中5-HMF不但没增加反而略降低。说明五味子中5-HMF主要来源于五味子炮制过程中的糖分解,但起主要催化作用的不是酸,而可能是金属元素、水蒸汽及空气中的氧等多重因素共同作用的结果。首次验证了5-HMF来源于炮制过程。(2)炮制对五味子中5-HMF含量的影响首次研究了炮制时间、温度及辅料用量对五味子中5-HMF含量的影响,发现随炮制时间和炮制温度的增加,蜜制、醋制、酒制和蒸制五味子中5-HMF含量明显增加。蜜制五味子中5-HMF含量随炮制时间的延长及辅料用量的增加而显著增加,酒制和醋制五味子随辅料用量的增加5-HMF呈现略下降的趋势。醋制五味子中5-HMF的量随用量增加而降低,进一步说明酸在五味子的5-HMF形成过程中起的作用不是最主要的。炮制温度、时间及辅料用量对五味子中5-HMF产生都有一定影响。5-HMF对各炮制因素的敏感性决定了其可以考虑作为一个控制五味子炮制程度的评价指标引入到质量监控体系中来。(3)炮制对五味子中五味子乙素含量和五味子乙素溶出率的影响建立了一种快速简捷、高灵敏度的测定各五味子饮片中五味子乙素的分析方法。色谱条件∶流动相∶甲醇-水-乙腈(70∶23∶7,V/V),Diamonsil C18柱(250×4.6mm,5μm),流速:1.0mL·min-1,检测波长:224 nm,进样量:1-2μl,检测时间:35 min,分离度>1.5,理论塔板数为>4000,峰对称性为0.95,精密度、稳定性和加样回收率均符合05年版中国药典的标准,灵敏度提高到原来254nm下的3.5倍。首次系统地研究了炮制时间、温度及辅料用量对五味子乙素含量及其溶出率的影响。发现生五味子、酒制、蒸制和醋制五味子的五味子乙素含量及其溶出率差异不明显,而蜜制五味子使五味子乙素含量明显下降。各五味子样品残渣中五味子乙素比原样品中五味子乙素的含量要高。除蜜制品外,炮制前后五味子乙素含量及其溶出率变化不明显,说明五味子乙素不是炮制后引起五味子功效改变的关键成分,也不是起引起五味子炮制后护肝作用增强的主要成分,对各炮制因素的不敏感决定其不能作为炮制程度指标。根据五味子乙素在煎煮过程中发生变化的现象提出参考化工过程的物料平衡法建立一种化学成分平衡法来研究中药的功效成分或毒性成分。通过比较原药材、煎煮后残渣的成分减少、增加或消失的情况,结合水煎剂中的成分变化情况来筛选主要功效成分或者毒效成分更加科学。该方法主要针对中药多数采用水煎方式入药,而只有水煎液中的化学成分才能进入体内真正发挥作用而提出的。(4)炮制对五味子中总木脂素及总木脂素煎出率的影响用五味子乙素作对照品,采用分光光度法研究炮制温度、时间及辅料用量对五味子中具亚甲二氧基结构的木脂素类成分含量及其溶出率的影响。结果炮制辅料对五味子总木脂素含量影响最大。蜜制五味子随辅料用量的增加五味子总木脂素含量明显增加,而酒制和醋制五味子不但没促进五味子木脂素含量增加反而比生品五味子总木脂素含量有所降低。各炮制品残渣的总木脂素含量明显低于生品残渣的总木脂素含量,而醋制品残渣中总木脂素含量要比其它制品中总木脂素低,结合炮制对五味子总木脂素含量变化的影响,总木脂素的溶出率应该以醋制品和蜜制品最高,说明用总木脂素的含量考察五味子制品的护肝作用有一定道理。五味子残渣中具亚甲二氧基的五味子乙素含量增加而总木脂素含量降低,说明现有的总木脂素含量测定方法并未真正反映发挥生物学活性的成分的含量,而在五味子醋制品煎煮过程中减少最多或者蜜制品中增加最多的木脂素成分可能是发挥护肝作用的主要的活性成分。因此目前采用Ecgrine反应测定的总木脂素中只有部分成分可能是五味子在炮制前后功效改变的物质基础,若要精确测定具有护肝作用木脂素的含量有待于进一步发展更有针对性的测定方法。从液相色谱图来看,五味子蜜制、生品、酒制品、醋制品及蒸制品在各色谱峰的含量变化上有一定差别。蜜制五味子和生品的5分钟之前的峰面积明显比醋制品、酒制品和蒸制品峰面积大,酒制品和醋制品改变的色谱峰种类也各不相同。可能5分钟之前的色谱峰跟蜜制及生品五味子的润肺镇咳作用有关,而酒制品改变的色谱峰可能跟滋补作用有关,醋制品改变的色谱峰跟增强护肝作用有关。(5)炮制对五味子水浸率及醇浸率的影响通过研究炮制时间、温度及辅料用量对五味子水浸率和醇浸率的影响发现:炮制时间、炮制温度及炮制辅料用量对五味子水浸率都有一定影响,水浸率可作为五味子饮片或中药材质量控制的一个辅助质量指标引入到五味子质量控制体系中。五味子醇浸率作为质量评价指标引入质量评价体系的可参考性远不及水浸率合理,因醇浸率对炮制时间、炮制温度和炮制辅料用量的敏感程度远不如水浸率明显,且五味子炮制品特别是醋制品的护肝效果优于生品,但生品的醇浸率要高于醋制品和酒制品。说明醇浸率很难作为五味子护肝评价指标。从炮制对五味子水浸率、5-HMF含量、总木脂素、五味子乙素和醇浸率的影响来看,五味子水浸率、总木脂素和5-HMF含量可作为质量指标引入到质量控制体系中来。较好的炮制方法为沸水浴炮制,蜜制五味子炮制4-6小时、蜂蜜加入量60-80g/100g五味子;酒制五味子炮制4小时、黄酒加入量10-20g/100g五味子;醋制五味子炮制6小时、米醋加入量40-60g/100g;蒸制五味子炮制6小时。目前记载的一般辅料用量为酒制15-20g/100g药材、醋制20g/100g药材、蜜制30g/100g药材可能是根据经验对药材的拌匀外观程度而来,并未研究对实际成分的影响作为依据的炮制方法值得商榷。炮制时间只是靠炮制后感观指标的黑润状态来控制,并未有实验数据说明此时的各种指标成分的具体变化的做法需要进行改进。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 第一章 文献综述
  • 前言
  • 第一节 生脉饮研究概述
  • 1 生脉饮的研究发展历史
  • 2 生脉饮的药理学研究
  • 3 生脉饮化学成分研究
  • 第二节 五味子研究概述
  • 1 五味子炮制历史沿革
  • 1.1 五味子炮制方法的研究进展
  • 1.2 炮制对五味子功效及化学成分影响的研究进展
  • 2 五味子的化学成分及其生物学活性研究进展
  • 2.1 五味子的化学成分研究
  • 2.1.1 五味子中木脂素类化学成分研究
  • 2.1.2 五味子中的三萜类化学成分研究
  • 2.1.3 五味子中挥发油成分的研究
  • 2.1.4 五味子中其它化学成分的研究
  • 2.2 五味子的生物学活性研究
  • 2.2.1 五味子护肝作用的研究
  • 2.2.2 五味子抗氧化作用的研究
  • 2.2.3 五味子抗肿瘤及免疫调节作用的研究
  • 2.2.4 五味子对心脑血管系统作用的研究
  • 2.2.5 五味子对呼吸系统作用的研究
  • 2.2.6 五味子的其它生物学活性研究
  • 2.2.7 五味子的毒性研究
  • 第三节 炮制对中药化学成分及生物学活性影响的研究概述
  • 1 中药的炮制方法及常用辅料
  • 1.1 中药的炮制方法
  • 1.1.1 中药净制技术
  • 1.1.2 中药切制技术
  • 1.1.3 中药炮制技术
  • 1.2 中药炮制的常用辅料
  • 1.2.1 液体辅料
  • 1.2.2 固体辅料
  • 2 炮制对中药化学成分影响的研究
  • 2.1 炮制对中药中某种已知功效成分影响的研究
  • 2.2 炮制对中药中已知功效的某大类化合物总含量影响的研究
  • 2.3 炮制对中药中醇浸率、水煎率含量影响的研究
  • 2.4 炮制对中药中微量元素含量影响的研究
  • 3 炮制对中药生物学活性影响的研究
  • 第四节 课题研究背景
  • 1 5-HMF研究简介
  • 2 立项依据
  • 第二章 生脉饮中5-HMF来源机制的研究
  • 前言
  • 第一节 5-HMF分析方法的建立
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 试验材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 试验方法
  • 2.1 供试液的制备
  • 2.2 色谱分析条件及系统适应性考察
  • 2.3 工作曲线的建立
  • 2.4 精密度的考察
  • 2.5 稳定性考察
  • 2.6 重现性考察
  • 2.7 加样回收率考察
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 系统适应性
  • 3.2 线性关系
  • 3.3 精密度
  • 3.4 稳定性
  • 3.5 重现性
  • 3.6 加样回收率
  • 4 结论
  • 第二节 生脉饮中5-HMF来源的研究
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 实验方法
  • 2.1 分析方法
  • 2.2 样品溶液的制备
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 加糖量对五味子中5-HMF产生的影响
  • 3.2 五味子量及酸性环境改变对麦冬煎煮过程中5-HMF产生的影响
  • 3.3 五味子和麦冬共煎及五味子单煎对5-HMF产生的影响
  • 4 结论
  • 第三节 五味子中5-HMF来源机制的研究
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 实验方法
  • 2.1 分析方法
  • 2.2 浸泡时间对五味子中5-HMF含量影响的样品溶液制备
  • 2.3 煎煮时间对五味子中5-HMF含量影响的样品溶液制备
  • 2.4 不同来源的五味子加入量对5-HMF含量影响的样品溶液制备
  • 2.5 煎煮时间和加热温度对生五味子产生5-HMF含量影响的样液制备
  • 2.6 煎煮和炮制过程对五味子产生5-HMF含量影响的样品溶液制备
  • 2.7 五味子中5-HMF来源于炮制过程中还原糖分解的验证样品溶液制备
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 浸泡时间对五味子中5-HMF产生量的影响
  • 3.2 煎煮时间对五味子饮片中5-HMF产生量的影响
  • 3.3 不同来源的五味子加入量改变对煎煮液中5-HMF含量测定的影响
  • 3.4 煎煮温度和时间对生五味子中5-HMF产生量的影响
  • 3.5 炮制和煎煮过程对五味子中5-HMF产生含量的影响
  • 3.6 五味子中5-HMF主要来源于炮制过程中还原糖的分解
  • 4 结论
  • 本章小结及建议
  • 第三章 炮制对五味子外观性状及重量的影响
  • 1、实验材料和仪器
  • 1.1 实验材料
  • 1.2 实验仪器
  • 2 实验方法
  • 2.1 炮制温度影响的样品制备
  • 2.2 炮制时间影响的样品制备
  • 2.3 炮制辅料用量影响的样品制备
  • 2.4 炮制对五味子样品重量的影响
  • 3 实验结果
  • 3.1 蒸制后的各五味子样品
  • 3.2 醋制后的各五味子样品
  • 3.3 酒制后的各五味子样品
  • 3.4 蜜制后的各五味子样品
  • 3.5 炮制后的五味子样品的重量变化情况
  • 4 结论
  • 本章小结及建议
  • 第四章 炮制对五味子中5-HMF含量影响的研究
  • 前言
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 实验方法
  • 2.1 分析方法
  • 2.2 样品溶液的制备
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 炮制时间对五味子中5-HMF产生量的影响
  • 3.2 炮制温度对五味子中5-HMF产生量的影响
  • 3.3 炮制辅料用量对五味子中5-HMF产生量的影响
  • 4 结论
  • 本章小结及建议
  • 第五章 炮制对五味子中五味子乙素含量及其溶出率的影响
  • 第一节 五味子中五味子乙素分析方法的建立
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 试验材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 试验方法
  • 2.1 供试液的制备
  • 2.2 色谱分析条件及系统适应性考察
  • 2.3 工作曲线的建立
  • 2.4 精密度的考察
  • 2.5 稳定性考察
  • 2.6 重现性考察
  • 2.7 加样回收率考察
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 系统适应性
  • 3.2 线性关系
  • 3.3 精密度
  • 3.4 稳定性
  • 3.5 重现性
  • 3.6 加样回收率
  • 4 结论
  • 第二节 炮制对五味子中五味子乙素含量影响的研究
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 试验材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 试验方法
  • 2.1 分析方法
  • 2.2 炮制时间对五味子中五味子乙素含量影响的样品溶液的制备
  • 2.3 炮制温度对五味子中五味子乙素含量影响的样品溶液的制备
  • 2.4 炮制辅料用量对五味子中五味子乙素含量影响的样品溶液的制备
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 炮制时间对五味子中五味子乙素含量的影响
  • 3.2 炮制温度对五味子中五味子乙素含量的影响
  • 3.3 炮制辅料用量对五味子中五味子乙素含量的影响
  • 4 结论
  • 第三节 炮制对五味子中五味子乙素煎出量影响的研究
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 试验材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 试验方法
  • 2.1 分析方法
  • 2.2 炮制时间对五味子乙素溶出率影响的样品溶液的制备
  • 2.3 炮制温度对五味子乙素溶出率影响的样品溶液的制备
  • 2.4 炮制辅料用量对五味子乙素溶出率影响的样品溶液的制备
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 炮制时间对五味子乙素溶出率的影响
  • 3.2 炮制温度对五味子乙素溶出率的影响
  • 3.3 炮制辅料用量对五味子乙素溶出率的影响
  • 4 结论
  • 本章小结及建议
  • 第六章 炮制对五味子中总木脂素含量及其溶出率的影响
  • 第一节 五味子中总木脂素分析方法的建立
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 试验材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 试验方法
  • 2.1 供试液的制备
  • 2.2 精密度的考察
  • 2.3 稳定性考察
  • 2.4 工作曲线的建立
  • 2.5 重现性考察
  • 2.6 加样回收率考察
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 精密度
  • 3.2 稳定性
  • 3.3 线性关系
  • 3.4 重现性
  • 3.5 加样回收率
  • 4 结论
  • 第二节 炮制对五味子中总木脂素含量影响的研究
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 试验材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 试验方法
  • 2.1 分析方法
  • 2.2 炮制时间对五味子中总木脂素含量影响的样品溶液的制备
  • 2.3 炮制温度对五味子中总木脂素含量影响的样品溶液的制备
  • 2.4 炮制辅料用量对五味子中总木脂素含量影响的样品溶液的制备
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 炮制时间对五味子中总木脂素含量的影响
  • 3.2 炮制温度对五味子中总木脂素含量的影响
  • 3.3 炮制辅料用量对五味子中总木脂素含量的影响
  • 4 结论
  • 第三节 炮制对五味子中总木脂素溶出量影响的研究
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 试验材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 试验方法
  • 2.1 分析方法
  • 2.2 炮制时间对五味子中总木脂素溶出量影响的样品溶液的制备
  • 2.3 炮制温度对五味子中总木脂素溶出量影响的样品溶液的制备
  • 2.4 炮制辅料用量对五味子中总木脂素溶出量影响的样品溶液的制备
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 炮制时间对五味中总木脂素溶出率的影响
  • 3.2 炮制温度对五味子总木脂素溶出率的影响
  • 3.3 炮制辅料用量对五味子中总木脂素溶出率的影响
  • 4 结论
  • 本章小结及建议
  • 第七章 炮制对五味子水浸率和醇浸率的影响
  • 第一节 炮制对五味子水浸率影响的研究
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 试验材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 试验方法
  • 2.1 测定方法
  • 2.2 炮制时间对五味子水浸率影响的样品溶液的制备
  • 2.3 炮制温度对五味子水浸率影响的样品溶液的制备
  • 2.4 炮制辅料用量对五味子水浸率影响的样品溶液的制备
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 炮制时间对五味子水浸率的影响
  • 3.2 炮制温度对五味子水浸率的影响
  • 3.3 炮制辅料用量对五味子水浸率的影响
  • 4 结论
  • 第二节 炮制对五味子醇浸率影响的研究
  • 1 材料与仪器
  • 1.1 试验材料与试剂
  • 1.2 试验仪器
  • 2 试验方法
  • 2.1 测定方法
  • 2.2 炮制时间对五味子醇浸率影响的样品溶液的制备
  • 2.3 炮制温度对五味子醇浸率影响的样品溶液的制备
  • 2.4 炮制辅料用量对五味子醇浸率影响的样品溶液的制备
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 炮制时间对五味子醇浸率的影响
  • 3.2 炮制温度对五味子醇浸率的影响
  • 3.3 炮制辅料用量对五味子醇浸率的影响
  • 4 结论
  • 本章小结及建议
  • 第八章 总结与建议
  • 第一节 实验总结
  • 第二节 建议与展望
  • 论文创新点
  • 攻读博士学位期间发表和待发表的论文及专利
  • 致谢
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    生脉饮中5-HMF来源机制及炮制对五味子中化学成分影响的研究
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