黄精HPLC指纹图谱的研究及其不同产地的质量评价

论文摘要

黄精是百合科黄精属的植物黄精（Polygonatum sibiricum Red.）、滇黄精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）、多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua.）的干燥根茎入药。这三种黄精原生药均为《中华人民共和国药典》（2010年版）收录品种。黄精多分布于陕西、河北等省,滇黄精多分布于广西、云南等省,多花黄精多分布于湖南、贵州等省。黄精具有益气养阴、补肾健脾的功效,出自《雷公炮炙论》。现代主要用于治疗糖尿病、心血管疾病、抗肿瘤、提高免疫力等方面,是我国较常用的中药之一。为了进一步完善黄精药材的质量标准,比较研究黄精适合生长的区域,同时为汉中略阳黄精基地产黄精的规范化生产提供参考,本研究对陕西杨凌8批黄精（8个不同时期采挖于陕西杨凌的黄精根茎）的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱（以下简称黄精HPLC指纹图谱）进行了研究,利用共有模式和平均矢量的方法建立了黄精HPLC指纹图谱的标准图谱,并对其方法学实验进行了验证;又对8个不同产地的黄精HPLC指纹图谱进行了研究,结合一些主要有效成分的指标测定对黄精的质量标准进行了一定程度的补充和完善,期望能给黄精的质量控制标准提供一定的参考。本论文主要内容和结果如下:1陕西杨凌黄精的HPLC指纹图谱研究本研究对8个不同时期采挖自陕西杨凌的黄精进行了HPLC指纹图谱的研究,优化了的色谱条件为:Waters 1525二元高效液相色谱仪,Waters 2996二极管列阵检测器,Waters UV-2487检测器,Waters XB-C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,Empower2色谱分析软件,以A:乙腈和B:水为流动相,采用二元梯度洗脱,梯度程序为:0-10min,5%-10%A（v/v）;10-30min,10%-35%A（v/v）;30-40min,35%-60%A（v/v）;40-60min,60%-100%A（v/v）。流速1mL/min,柱温30℃,检测波长200nm,进样量20μL,结果显示该法建立的黄精HPLC指纹图谱专属性强、准确、可靠,能比较真实全面的反应出杨凌黄精的特征。2 8个不同产地的黄精HPLC指纹图谱研究运用陕西杨凌产黄精的HPLC标准指纹图谱所建立的方法对采挖于八个不同产地的黄精HPLC指纹图谱进行分析研究,结果显示在陕西杨凌产黄精中检测到的16个主要的指纹峰在其他7个产地产黄精中均能检测到,但是同种成分的含量相对有差异,这也显示了各产地黄精间的质量不同;同时运用HPLC法研究了各产地间黄精的薯蓣皂苷元的含量,结果河北安国黄精薯蓣皂苷元含量相对最高,陕西汉中其次,云南普洱最低。3黄精水分和灰分含量的研究对8个不同产地黄精的水分、总灰分和酸不溶性灰分含量进行研究,结果水分均低于《中华人民共和国药典》（2010年版）规定的上限15%;而灰分测定结果除了河北安国和贵州遵义的酸不溶性灰分没有检出,其他各产地黄精中两种灰分含量均低于《中华人民共和国药典》（2010年版）中的规定,属于合格样品,其中河南新乡的两种灰分含量都是相对最高的,而贵州遵义黄精的总灰分含量相对最少,陕西汉中黄精的酸不溶性灰分含量最少,这可能和运输储藏以及处理的过程有关。4黄精浸出物含量的研究按照《中华人民共和国药典》（2010年版）要求对8个不同产地黄精的醇溶性浸出物含量进行研究,得到结果比较好,8个产地黄精的醇溶性浸出物含量均达标,说明这8个产地所含有效成分达标,但是不同产地间存在差异,河北安国黄精醇溶性浸出物含量最高,湖南长沙黄精醇溶性浸出物含量最少,浸出物的多少对评价黄精的质量至关重要。5黄精多糖含量的研究按照《中华人民共和国药典》（2010年版）规定,用蒽酮-硫酸法和紫外分光光度法对8个不同产地黄精的多糖含量进行了研究,结果表明:陕西汉中略阳GAP基地产黄精多糖含量相对最高,这种结果可能的原因除了和产地气候等因素有关外,陕西汉中略阳基地的黄精多糖含量高也和科学的人工栽培管理方式有关。6黄精质量评价因子的方差分析运用DPS软件对水分、总灰分、浸出物、薯蓣皂苷元、多糖、指纹图谱的两种相似性评价方式作为7个影响不同产地间黄精质量的因子来进行方差分析。结果显示:薯蓣皂苷元和多糖不同产地间差异极显著,说明应该将这两项指标用于评价黄精的质量,本文建议将这两项指标和黄精的HPLC指纹图谱作为黄精质量标准完善的一个参考。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 研究依据、目的和意义
• 1.2 中药指纹图谱的发展
• 1.3 中药指纹图谱的定义和分类
• 1.3.1 定义
• 1.3.2 分类
• 1.3.2.1 依据测定目标分类
• 1.3.2.2 依据研究对象分类
• 1.3.2.3 依据测定方法分类
• 1.4 中药指纹图谱的国内外研究进展
• 1.4.1 国内研究进展
• 1.4.2 国外研究进展
• 1.5 HPLC 指纹图谱的概述
• 1.5.1 HPLC 法发展简史
• 1.5.1.1 HPLC 法的建立和完善
• 1.5.1.2 HPLC 技术在我国的发展
• 1.6 中药HPLC 指纹图谱的建立及方法验证
• 1.6.1 中药HPLC 指纹图谱的建立
• 1.6.1.1 研究对象的确定
• 1.6.1.2 供试品的收集
• 1.6.1.3 HPLC 指纹图谱色谱条件的选择
• 1.6.2 中药HPLC 指纹图谱的方法学验证
• 1.6.2.1 专属性
• 1.6.2.2 准确度
• 1.6.2.3 精密度
• 1.7 黄精的资源植物研究
• 1.7.1 黄精的本草考证
• 1.7.2 产地分布
• 1.7.3 我国入药的黄精品种
• 1.8 黄精的鉴别和质量的研究
• 1.8.1 黄精的鉴别
• 1.8.1.1 性状鉴别
• 1.8.1.2 显微鉴别
• 1.8.2 对黄精质量方面的研究
• 1.9 黄精的化学成分和药理功效的研究
• 1.9.1 黄精的化学成分的研究
• 1.9.2 药理疗效的研究
• 1.9.2.1 对免疫系统的影响
• 1.9.2.2 对血糖血脂的调节作用
• 1.9.2.3 黄精的抗衰老作用
• 1.9.2.4 黄精的抗肿瘤作用
• 1.9.2.5 黄精的抑菌消炎作用
• 第二章 方法学实验研究
• 引言
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 仪器与材料
• 2.1.2 样品的制备
• 2.1.2.1 指纹图谱供试品溶液制备
• 2.1.2.2 含量测定供试品制备
• 2.1.2.3 标品溶液的制备
• 2.1.3 色谱条件
• 2.1.3.1 指纹图谱测定的色谱条件
• 2.1.3.2 含量测定的色谱条件
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 精密度实验
• 2.2.2 重现性实验
• 2.2.3 稳定性实验
• 2.2.4 线性实验
• 2.3 讨论
• 第三章 陕西杨凌黄精的HPLC 指纹图谱研究
• 引言
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 仪器与材料
• 3.1.2 样品的制备
• 3.1.2.1 指纹图谱测定的供试品溶液制备
• 3.1.2.2 含量测定的供试品溶液制备
• 3.1.2.3 对照品的制备
• 3.1.3 色谱条件
• 3.1.3.1 指纹图谱测定的色谱条件
• 3.1.3.2 含量测定的色谱条件
• 3.2 结果分析
• 3.2.1 黄精标准HPLC 指纹图谱的建立
• 3.2.2 相似度评价
• 3.3 讨论
• 第四章 不同产地黄精的HPLC 指纹图谱研究
• 引言
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 仪器和材料
• 4.1.2 样品的制备
• 4.1.2.1 指纹图谱测定的供试品溶液制备
• 4.1.2.2 含量测定的供试品溶液制备
• 4.1.2.3 对照品的制备
• 4.1.3 色谱条件
• 4.1.3.1 指纹图谱测定的色谱条件
• 4.1.3.2 含量测定的色谱条件
• 4.2 结果分析
• 4.2.1 8 个不同产地黄精HPLC 结果讨论
• 4.2.2 薯蓣皂苷元含量测定
• 4.3 讨论
• 第五章 不同产地黄精的质量评价
• 引言
• 5.1 仪器和材料
• 5.2 水分含量的测定
• 5.2.1 测定方法
• 5.2.2 结果分析
• 5.3 灰分含量的测定
• 5.3.1 总灰分的测定
• 5.3.2 酸不溶性灰分的测定
• 5.3.3 结果分析
• 5.4 浸出物的测定
• 5.4.1 浸出物测定方法
• 5.4.2 结果分析
• 5.5 多糖含量的测定
• 5.5.1 对照品溶液的制备
• 5.5.2 标准曲线的制备
• 5.5.3 多糖测定法
• 5.5.4 结果与分析
• 5.6 8 个不同产地黄精质量评价指标的方差分析
• 5.7 讨论
• 第六章 结论
• 6.1 陕西杨凌8 批黄精的HPLC 指纹图谱的研究
• 6.2 八个不同产地黄精HPLC 指纹图谱的研究
• 6.3 不同产地黄精的质量评价
• 6.4 黄精质量标准的完善
• 6.5 创新点与不足
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介