蜂蜜中林可霉素残留检测方法的研究

论文摘要

林可霉素属于林可胺类抗生素,能有效的抑制革兰氏阳性菌,广泛应用于蜂业生产中,对蜜蜂美洲幼虫腐臭病（AFB）有很好的防治效果。为保障消费者安全,控制林可霉素在蜂产品中的残留,迫切需要建立一种灵敏、高效的林可霉素药物残留检测技术。基于此,本文建立了可用于蜂蜜中林可霉素残留检测的高效液相色谱紫外检测（HPLC/UV）法和高效液相色谱-电喷雾串联质谱（LC-ESI-MS/MS）法。1.蜂蜜中林可霉素残留HPLC/UV检测方法的建立建立了林可霉素在蜂蜜中残留检测的高效液相色谱紫外检测（HPLC/UV）法。样品经提取净化、反相液相色谱分离,用二极管阵列检测器进行检测。检测波长为204nm,流动相为硼砂缓冲液（pH5.0）:甲醇:乙腈=70:26:4（V/V）,流速1.0mL/mim进样量为20μL。用AgilentHypersil BDS-C18250mm×4.6mm色谱柱分离检测,在优化的色谱分离条件下,林可霉素色谱行为良好,药物的保留时间在6.9min。在1.0～20μg·mL-1线性范围内,峰面积与添加浓度的线性关系良好（r2＞0.99993）。在2.5、5.0、10.0μg·g-13个添加水平,林可霉素的平均回收率范围为93.02±1.22%,日内测定结果的相对标准偏差小于1.58%,日间测定结果的相对标准偏差小于1.49%,最低检测限75ng·g-1。2.蜂蜜中林可霉素残留LC-ESI-MS/MS检测方法的建立建立了蜂蜜中林可霉素残留的高效液相色谱-电喷雾串联质谱（HPLC-ESI-MS/MS）检测方法。样品经固相萃取提取净化、液相色谱分离后进行质谱分析,在多反应监测模式（MRM）下进行特征母离子、子离子对信号采集。根据保留时间、母离子和两个特征子离子信息行定性分析,以离子峰度最强的基峰离子m/z126进行定量。在1.0～20ng·mL-1线性范围内,峰强度与添加浓度的线性关系良好（r2＞0.9996）。在2.5、5.0、10.0ng·g-13个添加水平,林可霉素的平均回收率范围为95.1±3.3%,日内测定结果的相对标准偏差小于5.3%,日间测定结果的相对标准偏差小于8.5%,最低检测限0.1ng·g-1。实验结果表明,本文报道的两种用于蜂蜜中林可霉素残留检测的方法,灵敏度高、精密度好,达到了林可霉素残留分析的要求。方法的建立将为林可霉素的残留检测提供新方法,并对监控其在蜂产品中的残留,保障和维护人们的健康,提供重要的理论和实践依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 文献综述
• 1.我国目前蜂产品中抗菌药物残留的现状及危害
• 1.1 抗菌药物的残留现状
• 1.2 抗菌药物残留的危害
• 1.3 抗菌药物残留的原因
• 2.蜂产品中抗菌药物残留常用检测方法
• 2.1 微生物检测法
• 2.2 免疫分析法
• 2.3 理化检测法
• 3.林可霉素概况
• 3.1 林可霉素的简介
• 3.2 林可霉素的不良反应
• 3.3 林可霉素的残留现状
• 3.4 国内外林可霉素残留的研究现状
• 引言
• 1、材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 试液配制
• 1.2.2 林可霉素的HPLC分离条件的确立
• 1.2.3 LC/MS/MS条件的建立
• 1.2.4 样品前处理条件的建立
• 1.2.5 样品的检测
• 2、结果与分析
• 2.1 林可霉素色谱分离条件的优化
• 2.2 样品前处理条件的优化
• 2.3.林可霉素残留HPLC检测方法的建立
• 2.3.1 林可霉素的标准曲线与线性范围
• 2.3.2 回收率及色谱图
• 2.3.3 精密度
• 2.3.4 检测限
• 2.4.林可霉素残留LC/MS/MS检测方法的建立
• 2.4.1 林可霉素的标准曲线与线性范围
• 2.4.2 回收率及色谱图
• 2.4.3 精密度
• 2.4.4 检测限
• 2.5 林可霉素残留样品的检测
• 3、讨论
• 3.1 HPLC检测方法的选择
• 3.1.1 紫外检测波长的选择
• 3.1.2 HPLC流动相的选择
• 3.1.3 HPLC流速的影响
• 3.2 LC/MS/MS方法的选择
• 3.2.1 母离子及子离子的确定
• 3.2.2 多反应检测模式（MRM）参数的优化
• 3.2.3 LC/MS/MS流动相的选择
• 3.3 样品的前处理
• 3.3.1 提取液的选择
• 3.3.2 净化条件的选择
• 3.4 方法的回收率、灵敏度和精密度
• 3.4.1 回收率
• 3.4.2 灵敏度和精密度
• 4、结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介