加味升降散对IB病毒学及ARDS免疫学影响的实验研究

论文摘要

一、研究目的 探索中药对SARS相关病毒学及免疫学的机理,以鸡传染性支气管炎模型进行SARS相关病毒学研究,以ARDS模型进行SARS相关免疫学研究。 1、探讨鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的增毒传代及几种检测方法,在体内观察加味升降散的抗病毒作用。 2、体外细胞培养观察加味升降散的抗病毒、抑制病毒作用,以病毒蚀斑定量测定法揭示其可能的抗病毒机理。 3、建立小鼠ARDS模型及探讨加味升降散改善ARDS模型小鼠血气的作用。 4、探讨加味升降散对ARDS模型小鼠氧自由基及炎性介质的影响,并揭示其可能的抗氧化机理及细胞免疫调节机制。 5、探讨加味升降散对ARDS模型小鼠T淋巴细胞亚群的作用,并揭示其可能的免疫调节机理。 二、实验步骤 1、IBV的传代并检测 2、加味升降散对鸡传染性支气管炎体内模型的影响 3、IBV蚀斑减数实验 4、正常NIH小鼠动脉血气分析、肺系数及百草枯LD50的测定 5、小鼠ARDS模型的建立、加味升降散的急性毒性实验及加昧升降散对ARDS模型小鼠血气的影响 6、加味升降散对MDA、SOD、NO的影响 7、加味升降散对IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8及TNF-α的影响 8、加味升降散对小鼠T淋巴细胞亚群的影响 三、实验方法 1、按《动物病毒学》的方法接种传代IBV,NDV干扰法及侏儒胚实验均按《动物病毒学》的方法。RT-PCR检测方法:按RT-PCR试剂盒说明书操作,最终产物做琼脂糖凝胶电泳,电泳产物进行紫外检测并用mini-visionaryTM凝胶成像系统记录试验结果。 2、IBV尿囊液,冻溶后缓慢滴入雏鸡双鼻、双眼,然后随机分为正常组,模型组,阳性对照组,中药大、中、小剂量,攻毒后10小时予以药物治疗,中药大剂量组2:1、中剂量组1:1、小剂量组1:2浓缩,每只小鼠每天灌胃0.6ml,分两次灌胃。阳性药物组予更昔络韦10mg/kg,用蒸馏水配制后灌胃0.6ml/只,正常组及模型组灌等体积蒸馏水。共观察9天,期间主要观察雏鸡的症状、大小便、死亡等指标。

论文目录

• 引言
• 文献综述
• 1 SARS研究进展
• 2 IBV研究进展
• 第一部分 加味升降散治疗鸡传染性支气管炎的机理研究
• 实验一 IBV的传代及检测
• 1 IBV的传代
• 2 IBV的检测
• NDV干扰法检测IBV血凝滴度实验
• 侏儒胚实验
• RT—PCR法检测IBV病毒
• 实验二 加味升降散对鸡传染性支气管炎体内模型的影响
• 1 实验材料与方法
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验三 IBV蚀斑实验
• 1 鸡胚成纤维细胞原代培养
• 2 IBV蚀斑实验
• 实验材料与方法
• 蚀斑实验步骤
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 加味升降散对ARDS免疫损伤作用机理的研究
• 文献综述 ARDS研究进展
• 50的测定'>实验一 正常NIH小鼠动脉血气分析、肺系数及百草枯LD₅₀的测定
• 1 NIH小鼠动脉血气分析
• 2 NIH小鼠肺系数测定
• 50的测定'>3 百草枯LD₅₀的测定
• 4 讨论
• 实验二 小鼠ARDS模型的建立、加味升降散的急性毒性实验及加味升降散对ARDS模型小鼠血气的影响
• 1 NIH小鼠ARDS模型的建立
• 2 加味升降散的急性毒性实验
• 3 加味升降散对血气的影响
• 实验三 加味升降散对MDA、SOD、NO的影响
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验四 加味升降散对IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8及TNF-α的影响
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 实验五 加味升降散对小鼠T淋巴细胞亚群的影响
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 T淋巴细胞亚群检测
• 4 实验结果
• 5 讨论
• 参考文献
• 全文结论
• 主要创新点
• 展望
• 英文缩略词
• 致谢
• 附录