人参皂甙Rd对缺血性脑损害的保护作用

论文摘要

卒中是世界第二大死因,在发达国家是丧失劳力修正寿命年的第二大原因,在我国女性死因中列第二位,男性死因中列第三位。缺血性卒中约占卒中的80%,其早期治疗主要有两种途径:血管再通和神经保护治疗。使用tPA溶栓治疗受限于其过窄的时间窗和对出血等并发症的担心,尚不能广泛应用。神经保护的目标是挽救缺血半暗带尚具活力的脑组织,虽然很多神经保护药物未能在临床试验中证实其有效性,但其仍是卒中早期治疗研究中的热点,极具挑战性。人参皂甙Rd（GSRd）是人参皂甙的主要活性成分之一,在三七中的含量高达4.07%,实际应用经济。近来研究表明GSRd能够拮抗Ca2+通道,对红藻氨酸和氧化损伤中枢神经系统具有保护作用。本实验使用海马神经元氧糖剥夺（OGD）模型和大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,探讨了GSRd的神经保护作用和可能的作用机制。1.体外实验目的研究GSRd对海马神经元OGD损伤模型的保护作用和可能的作用机制。方法细胞取材自孕18天胎鼠,以B27/Neurobasal培养基培养神经元。体外培养至第6-8天进行OGD实验。OGD持续2 h,之后复糖复氧24 h。一组实验中GSRd在OGD前及OGD结束复氧开始时两次给药,另一组实验研究GSRd延后治疗的效果,仅在OGD结束,复氧开始时给药。24 h后使用LDH法和Hoechst 33342/PI双重染色法来评定细胞活力。用荧光染料DCFH-DA来显示活性氧簇（ROS）,用罗丹明123来显示线粒体膜电位（MMP）。荧光强度用流式细胞仪来测定。细胞丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性用试剂盒以分光光度法来测量。我们还研究了GSRd对抗谷氨酸兴奋性毒性的保护作用。结果PI吸收法显示2 h的OGD能够造成约50%的细胞坏死,GSRd（0.1-10μM）能够显著的降低坏死细胞数量。LDH法也得出相似的趋势。相反地,GSRd延后给药未能显示出显著的保护作用。OGD后,ROS增加到基线的2.08倍,GSRd能够显著的降低ROS的蓄积,降低MDA水平,提高SOD活性。OGD导致线粒体去极化,表现为罗丹明123的荧光强度降为基线的40.3%,GSRd能够稳定MMP。在兴奋性毒性的模型上,谷氨酸导致大量LDH漏出,显示明显的细胞损伤。戏剧性地,GSRd几乎能够完全消除这一损伤作用。结论GSRd在培养的海马神经元上对OGD损伤具有保护作用,这可能与其能够抑制氧化应激损伤,保持MMP和对抗谷氨酸毒性作用有关。2.在体实验目的在局灶性脑缺血大鼠模型上进一步探讨GSRd的神经保护作用。方法用线栓法来制备局灶性脑缺血模型,缺血持续2 h,再灌注同时给予GSRd或溶剂（生理盐水）对照给予治疗。24 h后进行神经功能缺损检查并且用TTC染色法评估脑梗死体积。结果再灌注24 h后,与溶剂治疗组相比,GSRd治疗组的动物在神经行为学上显示出明显的改善（GSRd 10 mg/Kg, P=0.012; GSRd 30 mg/Kg, P=0.002）。溶剂治疗组动物的平均脑梗死体积为232.7 mm3。GSRd治疗能够显著的降低梗死体积（10 mg/Kg, 189.2 mm3,P=0.018;30 mg/Kg,178.7 mm3,P=0.004）,5 mg/Kg治疗组也显示出边界性统计学意义（200.3 mm3, P=0.074）。结论GSRd（10, 30 mg/Kg）能够显著的改善神经功能缺损恢复,降低梗死体积。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 一 实验性脑缺血模型
• 1 体外模型
• 2 整体动物模型
• 3 对动物模型的反思
• 二 神经元缺血性死亡的机制
• 1 神经元死亡的形式
• 2 局灶性缺血:核心区和缺血半暗带
• 3 谷氨酸受体与兴奋性氨基酸毒性
• 2+'>4 Ca²⁺
• 5 自由基
• 6 一氧化氮（NO）
• 7 炎性细胞因子
• 8 凋亡
• 三 缺血性卒中急性期神经保护治疗的研究现状
• 1 钙离子拮抗剂
• 2 兴奋性氨基酸拮抗剂
• 3 GABA 受体激动剂
• 4 自由基清除剂及抗氧化剂
• 5 神经营养因子和造血生长因子
• 6 其他
• 7 对神经保护治疗的反思
• 四 人参皂甙与神经保护
• 1 人参皂甙各组分的结构性质和一般药理作用
• 2 人参皂甙在不同实验模型中的神经保护作用
• 3 人参皂甙 Rd
• 第一部分 体外实验
• 前言
• 方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 在体实验
• 前言
• 方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 个人简历
• 发表论文
• 致谢