桑叶、蚕体中1-脱氧野尻霉素的含量测定与分析

论文摘要

1-脱氧野尻霉素（DNJ）及其衍生物是一种高效的α-葡萄糖苷酶抑制剂,可用于治疗糖尿病、肥胖症、病毒感染等疾病。已发现多种植物和微生物具有合成和积累DNJ的特性,其中以桑叶中的含量最高。蚕一生食桑,其体内的DNJ含量远高于桑叶。受测试方法的限制,目前对于桑叶和蚕体中DNJ含量的变化或富集规律的系统研究并不多。本文建立了反相高效液相色谱-紫外检测法（RP-HPLC-UV）测定DNJ的方法,利用该方法系统研究了桑叶中DNJ含量的变化规律,以及蚕体对DNJ的富集作用。植物生物碱是植物在与昆虫协同进化过程中形成的一大类具有防御功能的次生代谢物质,DNJ是桑叶中含量较高的一种生物碱,但DNJ的对家蚕以外的昆虫的影响作用研究也较少。本论文在这些方面进行了一些研究,主要结果如下:1.DNJ测定方法。以0.05 mol/L的HCl为溶剂提取蚕粉和桑叶粉中DNJ,9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC-Cl）为衍生化剂,0.4mol/L硼酸钾缓冲液pH=8.5中进行衍生化反应,生成具有紫外吸收的DNJ-FMOC络合物,反相高效液相色谱-紫外检测法测定DNJ-FMOC。结果表明:衍生产物的色谱分离效果好,DNJ-FMOC峰面积与DNJ浓度呈正相关,加样回收率为94.98%,精密度实验、重现性实验、稳定性实验、回收率实验表明该方法可靠,可以作为家蚕、桑叶和相关药品保健品中DNJ含量测定的有效方法。2.采用反相高效液相色谱（RP-HPLC-UV）法测定了野蚕、家蚕不同品系间、5龄幼虫不同组织器官以及家蚕幼虫5龄不同生长时期的1-脱氧野尻霉素（DNJ）含量。结果表明:野蚕与家蚕、家蚕不同品系间DNJ含量存在极显著差异。在测试的样本中,野蚕全蚕粉中DNJ含量最高,为0.4278%,油蚕次之,黄血蚕最低,为0.2205%;家蚕不同组织中DNJ含量存在明显差异,蚕血粉含量最高,其次是中肠、体壁和脂肪体。丝腺几乎检测不出DNJ;蚕体内DNJ含量随蚕的发育呈明显变化,5龄第4天含量最高,为0.329%。5天后迅速下降。从利用降血糖成分DNJ的角度看,以油蚕制作全蚕粉,5龄3天-4天的幼虫是比较好的。3.测定栽培桑鲁桑、白桑、山桑、3大类9个品种,野生桑蒙桑、鬼桑、华桑、长果桑4大类6个品种的DNJ含量,结果显示:DNJ含量蒙桑＞鬼桑＞长果桑＞鲁桑＞山桑＞白桑＞华桑,蒙桑含量最高,华桑最低:蒙桑、鬼桑、长果桑3种野生桑中DNJ含量极显著高于其他种;栽培种中白桑和田白桑DNJ含量最高为0.11%,垂枝桑含量最低,为0.021%;鲁桑三个品种的含量在栽培种中均较高,为0.075-0.105%;不同地方栽培品种DNJ含量差异大。桑叶浆液汁中的DNJ含量极其显著高于桑叶全叶、叶片、叶脉,DNJ主要存在于桑叶浆液汁中。研究显示,野生桑是很好的利用活性物质的材料来源。4.采用盐酸酸抽提,阳离子交换提纯法从全蚕粉和桑叶粉中获得分别获得DNJ产品的得率为1.4789%和0.4899%,纯度为62.9269%和85.7877%。结果表明,盐酸抽提,阳离子交换提纯法提取桑、蚕中DNJ是一个比较可行的方法。产品的DNJ纯度都高于60%,是目前比较理想的方法。5.以来自烟草夜蛾卵巢的培养细胞sf9、sf21和家蚕卵巢培养细胞BmN为实验对象,分别以不同浓度DNJ对三种培养昆虫细胞添加处理,培养一定时间后,MTT法测定细胞增殖抑制率。处理36小时时对三种细胞增殖仅表现为轻微抑制或促进作用,但没有呈现一定规律,表明此时DNJ没有对细胞增殖形成明显影响。处理72小时,DNJ对家蚕BmN细胞表现为促进作用,有剂量效应,低浓度时高促进增殖,高浓度促进作用降低;对sF21增殖表现为抑制作用,抑制率呈现剂量效应,高浓度抑制率高,低浓度抑制率低,表现出DNJ对sf21的毒性作用;DNJ对Sf9细胞增殖有促进作用,不同浓度均有较高的增殖促进作用,但没有规律性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACTS
• 第1章 文献综述
• 1.1 桑叶的化学成分及药理作用的研究进展
• 1.2 家蚕幼虫的化学成分及药理作用的研究进展
• 1.3 利用蚕桑产品产物治疗糖尿病
• 1.4 1-脱氧野尻霉素化学结构和来源
• 1.5 1-脱氧野尻霉素的提取与检测
• 1.6 1-脱氧野霉素的药理作用
• 第2章 绪论
• 2.1 研究目的意义
• 2.2 研究内容
• 第3章 RP-HPLC法测定桑叶中DNJ含量的方法建立
• 3.1 材料
• 3.2 DNJ测定方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 第4章 桑叶中1-脱氧野尻霉素的检测与分析
• 4.1 材料
• 4.2 方法
• 4.3 结果
• 4.4 讨论
• 第5章 蚕体中1-脱氧野尻霉素的检测与分析
• 5.1 材料
• 5.2 方法
• 5.3 结果
• 5.4 讨论
• 第6章 1-脱氧野尻霉素提纯工艺的研究
• 6.1 材料
• 6.2 方法
• 6.3 结果
• 6.4 讨论
• 第7章 1-脱氧野尻霉素对培养细胞的毒力作用研究
• 7.1 材料
• 7.2 方法
• 7.3 结果
• 7.4 讨论
• 第8章 结论
• 参考文献
• 附录:
• 附录一 部分HPLC报告图
• 附录二 部分数据分析的报告图
• 致谢
• 发表文章及参加课题一览表