论文摘要
肾脏近曲小管钾离子通道在维持细胞膜电位、调节细胞体积以及维持水与电解质的重吸收和分泌等方面,均起着非常关键的作用,而且近曲小管是缺氧和中毒损伤最易发生的部位,因此,对肾脏近曲小管钾离子通道的研究具有较重要的生理学意义,目前尚未完全了解其生理学特性和功能。环孢素A是临床器官移植中广泛使用的免疫抑制剂,但其严重的肾毒性限制了它的使用。其发病机制尚未完全明了,目前研究发现它不仅可引起血液动力学的改变,而且对肾小管有直接的损害作用,且与近曲小管密切相关。但对于近曲小管离子通道的改变研究涉及甚少。为此,本实验建立正常小鼠肾脏近曲小管上皮细胞原代培养体系,采用细胞贴附式、内面向外式膜片钳技术研究正常小鼠肾脏近曲小管上皮细胞顶侧膜K+通道的电生理学特性,观察免疫抑制剂环孢素A对K+通道特性的影响,探讨其可能的作用机制。方法:采取改良的胶原酶消化-密度梯度离心法进行小鼠肾脏近曲小管上皮细胞的分离及纯化,获得的近曲小管上皮细胞在DMEM培养基中进行单层培养。通过台盼蓝排斥法鉴定细胞活性;光镜、碱性磷酸酶染色观察细胞形态学改变;透射电镜观察其超微结构。在原代培养的细胞和经环孢素A预处理（终浓度300ng/ml）的培养细胞上采用细胞贴附式、内面向外式膜片钳技术记录近曲小管顶侧膜K+通道电流进行分析比较。主要结果:1.采用改良的胶原酶消化-密度梯度离心法获得的细胞大小一致,活性>95%;光镜下可见未贴壁细胞为圆形,胞体光滑,折光性好,直径约8.5～10.5μm;贴壁细胞呈梭形,透明度增大而折光性减弱,融合的单层细胞呈鹅卵石样铺满瓶底;碱性磷酸酶染色呈阳性;电镜检查见面向液层的刷状缘有微绒毛形成,细胞内可见丰富的线粒体、溶酶体。2.小鼠肾近曲小管上皮细胞顶侧膜上的这种K+通道在多数膜片（61%）中自发性
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