复方丹参滴丸及主要成分对阿司匹林酯酶活性的影响

论文摘要

目的：阿司匹林为临床常用的解热、镇痛、抗炎药,经研究证实小剂量阿司匹林能不可逆地抑制血小板内的环氧化酶（COX）而发挥抗血小板聚集作用。但是,阿司匹林抵抗（aspirin resistance,AR）使得应用阿司匹林治疗的相当一部分患者在服用阿司匹林后并不能充分地抑制血小板聚集,限制了其应用。阿司匹林口服吸收后可被血浆、红细胞、胃黏膜及肝脏中的阿司匹林酯酶（乙酰水杨酸酯酶）水解为水杨酸而失去抗凝活性,因此阿司匹林的药理作用和阿司匹林抵抗现象都可能与人体内阿司匹林酯酶的活性相关。文献曾见报道复方丹参滴丸与阿司匹林联合应用能减少阿司匹林抵抗现象的发生。本研究的目的是探讨复方丹参滴丸及主要成分是否影响人血浆阿司匹林酯酶的活性,探明复方丹参滴丸减少阿司匹林抵抗现象是否与阿司匹林酯酶活性变化有关,为临床合理应用阿司匹林与复方丹参滴丸提供依据；正交试验法优化大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的体外培养方法及大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶活性的测定方法；研究大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶酶动力学特性；探讨复方丹参滴丸的主要成分对大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶酶促动力学参数的影响,丰富阿司匹林酯酶的研究。方法：采用RP-HPLC法同时测定血浆（或大鼠肝微粒体）中阿司匹林和水杨酸的浓度,以阿司匹林与水杨酸的比值CSA/C（ASA+SA）表示阿司匹林酯酶的活性,并用正交试验法对人血浆和大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的体外培养条件进行优化选择；通过体外培养对大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的酶动力学特性（最适反应温度、最适pH值等）进行研究；在培养体系中加入复方丹参滴丸及主要成分,与空白对照（不加复方丹参滴丸及主要成分）比较测定阿司匹林酯酶的活性变化,考察复方丹参滴丸及主要成分对人血浆阿司匹林酯酶活性及大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的酶动力学参数的影响。结果：建立的同时测定血浆中或大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林和水杨酸浓度的RP-HPLC可很好的满足实验要求。利用正交实验设计对人血浆体外培养条件优化选择得出的最佳培养条件是A282C3D1,即以1mmol·L-1阿司匹林,200μL血浆,在pH为7.4的培养液中培养20min。利用正交试验设计对大鼠肝微粒体匀浆体外培养条件优化选择得出的最佳培养条件是A1B3C1D3,即以0.8mmol·L-1阿司匹林,100μL大鼠肝微粒体匀浆,在pH为7.4的培养液中培养40min。阿司匹林酯酶对pH的变化较敏感,对热极不稳定。该酶的米氏常数Km=4.42mmo·L-1和Vmax=0.736 mmol·min-1·mL-1（大鼠肝微粒体匀浆）。研究显示复方丹参滴丸对人血浆阿司匹林酯酶的活性没有显著的影响（P>0.05）；实验用量的复方丹参滴丸中主要成分（丹参素钠、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、原儿茶醛、原儿茶酸、丹酚酸A、丹酚酸B、冰片、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1）对阿司匹林酯酶的活性影响不显著,无统计学意义（PP>0.05）。丹参素钠对大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶有诱导作用,隐丹参酮对大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶有一定的抑制作用（P<0.05）,其他成分对大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶影响不显著（P>0.05）。结论：通过对大鼠肝微粒体匀浆中的阿司匹林酯酶活性的测定发现阿司匹林酯酶活性对pH值的变化较敏感,且对热不稳定。临床上经常与阿司匹林合并使用的复方丹参滴丸对阿司匹林酯酶活性无显著性影响,而单一成分丹参素钠具有较显著的增强作用、隐丹参酮产生较显著的抑制作用,因此同时服用含有较高剂量的丹参素钠、隐丹参酮的药物时应该注意用量,尽量做到用药个体化,以达到临床合理用药的目的。复方丹参滴丸对人血浆阿司匹林酯酶活性的影响并不能解释复方丹参滴丸减少阿司匹林抵抗现象,即本研究未发现复方丹参滴丸减少阿司匹林抵抗现象与阿司匹林酯酶活性具有相关性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 1.药物代谢酶的多态性
• 2.阿司匹林酯酶
• 3.阿司匹林的药理作用及其抗血小板聚集的机理
• 3.1 阿司匹林的药理作用
• 3.2 阿司匹林抗血小板聚集的机理
• 4.复方丹参滴丸的药理作用
• 5.阿司匹林抵抗
• 6.药物相互作用
• 7.临床合理用药
• 第一部分 复方丹参滴丸及其主要成分对人血浆阿司匹林酯酶活性的影响
• 1 仪器与试剂
• 1.1 仪器
• 1.2 试剂
• 2 方法
• 2.1 标准溶液的配制
• 2.2 血浆阿司匹林酯酶体外测定培养条件的优化
• 2.3 血浆阿司匹林酯酶的体外培养
• 2.4 色谱条件
• 2.5 血浆阿司匹林酯酶活性评价
• 2.6 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 方法学评价
• 3.2 血浆阿司匹林酯酶体外测定培养条件优化结果
• 3.3 复方丹参滴丸及其主要成分对人血浆阿司匹林酯酶活性的影响
• 4.讨论
• 第二部分 大鼠肝微粒体内阿司匹林酯酶活性的测定方法及酶动力学研究
• 第一章 大鼠肝微粒体的制备及含量测定
• 1 仪器与试剂
• 1.1 仪器
• 1.2 动物与试剂
• 2 方法
• 2.1 肝微粒体制备
• 2.2 大鼠肝微粒体蛋白含量测定
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二章 大鼠肝微粒体内阿司匹林酯酶活性测定方法及体外培养条件的优化
• 1 仪器与试剂
• 1.1 仪器
• 1.2 试剂
• 2 色谱条件
• 3 实验方法和结果
• 3.1 对照品溶液的制备
• 3.2 大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶活性的测定
• 3.3 方法专属性
• 3.4 标准曲线和线性关系
• 3.5 最低检测限
• 3.6 精密度考察
• 3.7 回收率试验
• 4.大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶体外测定培养条件的优化
• 4.1 正交设计试验
• 4.2 实验方案及结果分析
• 第三章 大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的动力学特性研究
• 1.仪器与试剂
• 1.1 仪器
• 1.2 试剂
• 2.测定方法
• 2.1 色谱条件
• 2.2 大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶培养条件的建立以及活性的测定
• 3.结果与讨论
• 3.1 大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的反应进程曲线
• 3.2 大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的最佳反应温度
• 3.3 大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的最佳反应pH值
• m和V_max的测定'>3.4 大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的酶动力学常数K_m和V_max的测定
• 3.5 大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的pH值稳定性研究
• 3.6 大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的热稳定性研究
• 第三部分 复方丹参滴丸及其主要成分对大鼠肝微粒体匀浆阿司匹林酯酶活性的影响
• 1 仪器与试剂
• 1.1 仪器
• 1.2 试剂
• 2 方法
• 2.1 标准溶液的配制
• 2.3 大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶的体外培养
• 2.4 色谱条件
• 2.5 阿司匹林酯酶活性评价
• 2.6 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 丹参素钠对大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶活性的影响
• 3.2 隐丹参酮对大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶活性的影响
• 3.3 其他成分对大鼠肝微粒体匀浆中阿司匹林酯酶活性的影响
• 4. 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录
• 学位论文评阅及答辩情况表