论文摘要
目的:通过体外培养兔视网膜Müller细胞,模拟体内高糖环境,利用激光共聚焦显微镜结合荧光染色和免疫细胞化学染色方法,对高糖、高浓度胰岛素及中药糖网Ⅰ号等不同作用条件下的视网膜Müller细胞表达的血管内皮生长因子(vescular endothelial growth factor,VEGF)、葡萄糖转运载体蛋白(glucose transporter 1,GLUT1)进行定位和定量分析,探讨中药糖网Ⅰ号对DR的作用机制,为临床预防和治疗糖尿病性视网膜病变提供理论依据。 方法:1、利用组织块悬浮法原代培养兔视网膜Müller细胞。2、应用MTT法对不同浓度中药作用于高糖环境下的视网膜Müller细胞的细胞活力进行测定,筛选不同浓度的中药,以此确定中药的半数致死浓度,并在半数致死浓度以下设计浓度梯度。3、利用激光共聚焦显微镜结合免疫细胞化学、荧光染色的方法,定位定量分析高糖、高浓度胰岛素及不同浓度中药糖网Ⅰ号条件下体外培养的兔视网膜Müller细胞表达VEGF、GLUT1蛋白质的变化情况。 结果:1、高糖能降低视网膜Müller细胞的细胞活力;中药糖网Ⅰ号抑制高糖使视网膜Müller细胞活力的降低。2、高糖及高浓度胰岛素能明显增强视网膜Müller细胞VEGF蛋白质的表达,呈时间依赖性,3d表达增强,以细胞核表达增强为主,5d表达减弱,以细胞质表达为主。3、高糖及高浓度胰岛素作用3d,能明显增强视网膜Müller细胞GLUT1蛋白质的表达,且以细胞浆靠近核膜周围
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