鳜鱼营养成分分析及肌球蛋白重链基因克隆与表达

论文摘要

随着生活水平的不断提高，肉质细嫩，味道鲜美的鳜鱼逐渐获得消费者青睐。为了解释鳜鱼的优良肉质性状，本研究采用生物化学和蛋白质化学方法，以鲢鱼为对照，对鳜鱼的三个品种——大眼鳜、斑鳜、翘嘴鳜营养成分进行了比较分析；利用RT-PCR／cDNA克隆技术克隆了鳜鱼肌球蛋白重链基因，并分析了鳜鱼组织和发育阶段表达的差异性。1．营养指标测定。水分：105℃烘干失水法测定，野生大眼鳜为76.06％，斑鳜为76.16％，饲养的翘嘴鳜为81.43％、鲢鱼为82.10％；灰分：马福炉灰化法测定，鳜鱼干物质含量比较高；蛋白质：微量凯氏定氮法测定，野生大眼鳜与斑鳜的蛋白质含量均高于饲养翘嘴鳜和鲢鱼；脂肪：索氏抽提法测定，鲢鱼脂肪量高达5.25％，而翘嘴鳜、斑鳜、大眼鳜则只有1.09—2.18％；鱼油脂肪酸：气相色谱-质谱联用仪测定，翘嘴鳜、斑鳜、大眼鳜、鲢鱼四种鱼均含有的饱和脂肪酸为C14:0，C16:0，C18:0；单不饱和脂肪酸为C16:1，C18:1；多不饱和脂肪酸为C18:2，C20:5，C22:6；并且大部分为中长碳链脂肪酸。斑鳜、大眼鳜、翘嘴鳜饱和脂肪酸含量依次为：24.40％，29.29％，35.75％；不饱和脂肪酸含量依次为：71.96％，67.82％，54.88％。鲢鱼检测出饱和脂肪酸含量28.37％，不饱和脂肪酸为42.05％。2．获得MHC基因全长序列。鳜鱼MHC的cDNA全长为5938bp，含有3′转录序列124bp，两个结构域，一个5814bp开放阅读框（ORF），编码一个由1937个AA残基组成的蛋白质。SDS-PAGE和Western-blotting分析表明肌球蛋白重链基因在肌肉效应期之后开始表达，鱼苗和成鱼表达量较多，而在囊胚期、神经节期未见表达；在成鱼的肌肉表达量丰富，心脏有少量表达，脑、肾脏、脾脏等部位均未见表达。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 中英文缩写词简表
• 第一章 前言
• 1 鳜鱼生物学特性
• 1.1 形态特征
• 1.2 生活习性
• 1.3 食物与生长
• 1.4 繁殖
• 2 营养成分研究
• 2.1 肌肉生化成分
• 2.2 脂肪酸研究
• 2.2.1 多不饱和脂肪酸研究
• 2.2.2 鱼油提取多不饱和脂肪酸面临的问题
• 3 鳜鱼肌球蛋白重链基因研究
• 3.1 肌球蛋白的结构特征
• 3.2 鱼类肌肉组织与蛋白组成
• 3.3 肌球蛋白的重链基因、结构与功能
• 3.3.1 动物肌球蛋白重链的研究状况
• 3.3.2 鱼类肌球蛋白重链
• 3.3.3 鱼类肌球蛋白重链的同型异构体和差异表达
• 4 本试验研究目的意义
• 第二章 鳜鱼肌肉营养成分分析
• 1 材料和方法
• 1.1 材料和仪器设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 常规营养指标测定
• 1.2.2 脂肪酸成分测定
• 2 结果与分析
• 2.1 常规营养指标测定结果分析
• 2.2 脂肪酸成分测定结果分析
• 2.2.1 鲢鱼脂肪酸总离子流图与脂肪酸成分
• 2.2.2 鳜鱼脂肪酸总离子流图与脂肪酸成分
• 3 讨论
• 3.1 四种淡水鱼含肉率比较
• 3.2 肌肉生化分析
• 3.3 鱼肉营养成分影响因素
• 3.4 脂肪酸组成及含量比较
• 3.5 鱼油提取方法优化
• 3.6 脂肪酸衍生化条件优化
• 3.7 峰响应值影响因素
• 3.8 色谱分辨率影响因素
• 第三章 鳜鱼肌球蛋白重链基因克隆与表达
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 总RNA的提取
• 1.2.2 鳜鱼cDNA第一链的合成
• 1.2.3 引物的设计
• 1.2.4 MHC基因cDNA片段的获得
• 1.2.5 巢式-PCR方法扩增MHC的cDNA全长
• 1.2.6 序列生物信息学分析
• 1.2.7 鳜鱼MHC基因的RT-PCR分析
• 2 结果与分析
• 2.1 MHC基因克隆结果
• 2.1.1 总RNA提取结果
• 2.1.2 1%琼脂糖电泳分析及球蛋白重链基因PCR扩增产物
• 2.1.3 鳜鱼MHC基因cDNA序列全长及其相应的氨基酸序列
• 2.1.4 Genebank中鳜鱼MHC氨基酸序列比对
• 2.2 MHC表达差异分析
• 2.2.1 系统进化树及序列同源性分析
• 2.2.2 核苷酸及其推测的氨基酸序列同源性比较
• 2.2.3 RT-PCR检测结果
• 3 讨论
• 结论、试验创新与后续工作
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介