LDL、oxLDL对THP-1源性巨噬细胞PCSK9、LDLR表达的影响研究

论文摘要

前蛋白转化酶（ Proprotein convertase, PC）家族在多种前蛋白的生成过程中起重要作用,PCSK9基因（Proprotein convertase subtilisin/kexin 9-丝氨酸蛋白酶）编码神经凋亡调节转化酶即NARC-1,是PC家族的成员之一,它能够在蛋白水平降低肝细胞上LDLR的数量,影响LDL的内化,使血液中LDL不能被清除,从而导致高胆固醇血症。该基因的突变成为继LDLR、apoB100基因之后的第三种引起常染色体显性高胆固醇血症（ADH）的基因。研究PCSK9与LDLR之间的关系,探索PCSK9在高胆固醇血症以及动脉粥样硬化发生中的作用及机制,将有助于高胆固醇血症和动脉粥样硬化发病机制的研究,也能为防治高胆固醇血症和动脉粥样硬化提供新思路。本研究以THP-1源性巨噬细胞为研究对象,经过LDL、oxLDL处理后,观察细胞水平PCSK9、LDLR的变化及其规律,为PCSK9在动脉粥样硬化发生发展中的作用提供实验依据。目的:探讨LDL、oxLDL处理THP-1源性巨噬细胞后LDLR和PCSK9表达的变化,研究LDL、oxLDL对PCSK9、LDLR的不同影响,探讨THP-1源性巨噬细胞中PCSK9、LDLR之间的关系。方法:THP-1细胞与160nmol/L的佛波酯孵育24h,诱导成贴壁的巨噬细胞后,用0μg/ ml、10μg/ml、20μg/ ml、30μg/ ml的LDL处理THP-1巨噬细胞,油红O染色检测细胞荷脂情况,免疫荧光检测THP-1细胞上PCSK9蛋白表达及分布情况,RT-PCR、Western blot检测THP-1巨噬细胞上PCSK9、LDLR mRNA、蛋白质的表达。用0μg/ ml、10μg/ ml、20μg/ ml、30μg/ ml的oxLDL处理THP-1巨噬细胞,油红O染色检测细胞荷脂情况,RT-PCR、Western blot分别检测THP-1巨噬细胞上PCSK9、LDLR mRNA、蛋白质的表达。结果0μg/ ml、10μg/ml、20μg/ ml、30μg/ ml的LDL处理THP-1巨噬细胞后,油红O染色发现,随着LDL浓度的增大,细胞内脂滴数目增多,呈散在分布,免疫荧光染色发现PCSK9在THP-1源性巨噬细胞上有较强的表达,并且随着LDL浓度的增加而增多,RT-PCR、Western blot检测发现,LDL可以下调THP-1源性巨噬细胞中LDLR的表达,呈浓度依赖性,而同时PCSK9的表达上调,也呈浓度依赖性;用0μg/ ml、10μg/ml、20μg/ ml、30μg/ ml的oxLDL处理THP-1源性巨噬细胞,油红O染色发现,细胞里面出现可见脂滴,而且随着oxLDL浓度的增大,脂滴颗粒逐渐增大、增多,聚集成团。在本实验浓度范围内,oxLDL处理对THP-1巨噬细胞上PCSK9、LDLR mRNA、蛋白质的表达影响均不明显。结论:THP-1源性巨噬细胞上,同时有PCSK9和LDLR的表达; oxLDL对THP-1源性巨噬细胞LDLR表达没有影响,在本实验研究的浓度范围内,oxLDL对THP-1源性巨噬细胞PCSK9表达没有影响;LDL能够降低THP-1源性巨噬细胞表面LDLR的表达,同时上调PCSK9表达,说明在THP-1源性巨噬细胞中,LDLR和PCSK9的改变方向相反,而且有一定的相关性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 主要英文缩略语索引
• 论文正文
• 前言
• 实验材料
• 1.1 细胞和主要试剂来源
• 1.2 主要仪器
• 实验方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 脂蛋白的分离、氧化修饰及鉴定
• 2.3 实验分组
• 2.4 油红 O 染色
• 2.5 细胞免疫荧光
• 2.6 逆转录-聚合酶链反应
• 2.7 Western blot
• 2.8 统计学处理
• 实验结果
• 3.1 THP-1 油红 O 染色结果
• 3.2 LDL对THP-1巨噬细胞中LDLR、PCSK9 表达的影响
• 3.3 oxLDL 对 THP-1 巨噬细胞中 LDLR 、PCSK9 表达的影响
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 硕士期间发表的论文
• 致谢