基质细胞衍生因子-1在BMSCs定向趋化及骨修复中作用的研究

论文摘要

目的探讨基质细胞衍生因子-1（Stromal cell-derived-1,SDF-1）在BMSCs向骨折部位定向迁移及骨折修复过程的作用,为将来通过调控BMSCs的定向迁移来促进骨折愈合提供依据。方法:（1）经密度离心法从GFP转基因C57小鼠骨髓内分离培养BMSCs。并通过向成骨细胞、脂肪细胞诱导证明其具有多向分化能力,利用流式细胞仪检测其细胞表面分子CD44和CD34的表达。（2）4周龄雌性C57小鼠用10Gy的X线照射后,将1000个携带GFP的BMSCs与雄性小鼠的骨髓非贴壁细胞按1:1 000制成混合细胞悬液后从其尾静脉内注入,建立嵌合体动物模型。通过激光共聚焦显微镜检测嵌合体GFP阳性细胞在骨髓细胞中的比例。（3）嵌合体建立后,将135只嵌合体小鼠随机分为A、B、C组。3组均建立左胫骨骨折模型,A组为空白对照组,骨折局部仅加入ECM; B组:100ng/mlSDF-1+ECM;C组: 2ug/mlSDF-1抗体+ECM,三组局部注射的总量相同,均为0.1ml。分别于术后第14、21,28天拍摄左下肢侧位X线片,拍片后处死,取骨折部位标本行组织学检查,于术后第1、3、7、14天利用激光共聚焦显微镜检测各组骨折端GFP阳性细胞的数量,并于术后28天取骨折标本的进行抗折力测试。结果（1）分离培养的BMSCs呈克隆样生长,经激光共聚焦显微镜检测表明它们均呈GFP阳性;经成骨诱导培养后出现钙沉积;经成脂肪诱导后形成脂肪滴。（2）嵌合体建立8周后,移植的细胞归巢至骨髓内,其中GFP阳性细胞比例为3.12±0.11%。（3）术后第1、3、7、14天各相应时相点,骨折端的BMSCs数量B组>A组>C组,有显著性差异（P<0.05）;在术后14天、21天各相应时相点的骨痂量:B组>A组>C组,有显著性差异（P<0.05）,在第28天,A组>B组>C组,有显著性差异（P<0.05）;术后28天抗折力: B组>A组>C组,有显著性差异（P<0.05）。结论（1）通过密度离心法可以从GFP转基因C57小鼠骨髓内获取GFP阳性的BMSCs。（2）利用GFP阳性BMSCs与骨髓非贴壁细胞联合移植成功建立的C57小鼠嵌合体;（3）SDF-1可以促进BMSCs向骨折端迁移,并对骨折愈合具有促进作用。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分：C578L/6 GFP转基因小鼠BMSCs的分离培养与鉴定
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分：携带GFP转基因BMSCs的骨髓嵌合体小鼠动物模型的建立
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分：基质细胞衍生因子-1 在 BMSCs 定向趋化及骨修复中作用的研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 全文结论
• 致谢
• 综述：内源性骨髓间充质干细胞定向迁移的影响因素