TRAIL联合化疗药物诱导HEP-2、HNE-1细胞株凋亡的研究

论文摘要

背景:化学疗法是目前治疗鼻咽癌、喉癌的重要手段之一。大剂量的化疗药物在杀灭肿瘤细胞的同时,对机体组织可造成骨髓抑制、肝脏损害等相当严重的毒副作用,大大降低了肿瘤患者的生存质量。寻找既高效杀灭肿瘤细胞,又能降低其毒副作用的药物是现代肿瘤治疗的热点。已有研究报道,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）在杀灭肿瘤细胞的同时对正常细胞无明显毒副作用,且联合低毒性的化疗药物能高效诱导肿瘤细胞的凋亡,有望成为一种新型抗肿瘤药物。但它对人喉表皮癌细胞株（Human epidermal carcinoma cell line,HEP-2）、人鼻咽癌细胞株（Human nasopharyngeal carcinoma cell line,HNE-1）的研究报道甚少。本文旨在研究TRAIL联合5氟尿嘧啶（5-FU）、顺铂（DDP）对HEP-2、HNE-1细胞株增殖和凋亡的影响,并探讨了其可能的机制。目的:观察不同浓度的TRAIL、化疗药物（5-FU、DDP）分别和联合对HNE-1、HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响并探讨其可能机制。方法:1采用MTT检测不同浓度的TRAIL（1.0,10.0,100.0,1000.0ng/ml）;DDP（1.0,10.0,100.0μg/ml）;5-FU（1.0,10.0,100.0μg/ml）对HEP-2、HNE-1细胞株的增殖抑制作用。依据结果将实验分组为5组即空白对照组（无药物）;TRAIL（10.0ng/ml）处理组;DDP（1.0μg/ml）处理组;5-FU（1.0μg/ml）处理组;DDP（1.0μg/ ml）+TRAIL（10.0ng/ml）处理组;5-FU（1.0μg/ml）+TRAIL（10.0ng/ml）处理组进行以下实验。2采用MTT法检测不同处理组分别对HNE-1和HEP-2增殖抑制的影响。3采用FCM法检测AnnexinⅤ-FITC/PI双染色细胞后不同处理组细胞的凋亡,荧光显微镜下观察细胞形态。4采用Western-blot法检测不同处理组细胞中细胞型Fas相关死亡域样白介素1β转换酶抑制蛋白（Celluar Fas-ssociated death domain-like IL-1 beta converting enzyme inhibitory protein,c-FLIP）、核转录因子кB （Nuclear factorsкB,NF-кB）的表达情况。结果:1 TRAIL联合5-FU、DDP对HEP-2细胞株的研究:1)浓度为1.0μg/ml的5-FU、DDP可以抑制HEP-2细胞株的增殖,1.0ng/ml的TRAIL不能抑制HEP-2细胞株的增殖,10.0ng/ml以上浓度的TRAIL可抑制HEP-2细胞株的增殖。选取药物浓度为5-FU1.0μg/ml,DDP1.0μg/ml,TRAIL10.0ng/ml进行进一步的实验。2)DDP+TRAIL处理组HEP-2细胞株抑制率为（33.69±3.50）%,与TRAIL处理组（5.73±4.31）%和DDP处理组（15.06±8.83）%相比,HEP-2细胞株抑制率明显提高,差异具有统计学意义。3)5-FU+TRAIL处理组HEP-2细胞株抑制率为（29.21±9.80）%,与TRAIL处理组（5.73±4.31）%和5-FU处理组（12.68±5.20）%相比,HEP-2细胞株抑制率明显提高,差异具有统计学意义。4)DDP+TRAIL处理组HEP-2细胞株凋亡率为（24.76±1.20）%,与TRAIL处理组（0.24±0.023）%和DDP处理组（14.70±2.21）%相比,HEP-2细胞株凋亡率明显提高,差异具统计学意义。5)5-FU+TRAIL处理组HEP-2细胞株凋亡率为（14.33±0.78）%,与TRAIL处理组（0.24±0.023）%和5-FU处理组（2.25±0.56）%相比,HEP-2细胞株凋亡率明显提高,差异具统计学意义。6)TRAIL处理组、5-FU处理组、DDP处理组中c-FLIP、NF-　B蛋白的表达水平高于TRAIL+5-FU处理组和TRAIL+DDP处理组。2 TRAIL联合5-FU、DDP对HNE-1细胞株的研究:1)浓度为1.0μg/L的5-FU、DDP可以抑制HNE-1细胞株的增殖,1.0ng/ml的TRAIL不能抑制HNE-1细胞株的增殖,10.0ng/ml以上浓度的TRAIL可抑制HNE-1细胞株的增殖。选取药物浓度为5-FU1.0μg/ml,DDP1.0μg /ml,TRAIL10.0ng/ml进行进一步的实验。2)DDP+TRAIL处理组HNE-1细胞株抑制率为（38.61±7.56）%,与TRAIL处理组（5.73±4.42）%和DDP处理组（14.62±7.92）%相比,HNE-1细胞株抑制率明显提高,差异具有统计学意义。3)5-FU+TRAIL处理组HNE-1细胞株抑制率为（31.89±5.61）%,与TRAIL处理组（5.73±4.42）%和5-FU处理组（14.17±9.6）%相比,HNE-1细胞株抑制率明显提高,差异具有统计学意义。4)DDP+TRAIL处理组HNE-1细胞株凋亡率为（14.72±1.20）%,与TRAIL处理组（0.66±0.23）%和DDP处理组（2.19±0.52）%相比,HNE-1细胞株凋亡率明显提高,差异具统计学意义。5)5-FU+TRAIL处理组HNE-1细胞株凋亡率为（14.70±1.78）%,与TRAIL处理组（0.66±0.23）%和5-FU处理组（2.43±0.26）%相比,HNE-1细胞株凋亡率明显提高,差异具统计学意义。6)TRAIL处理组、5-FU处理组、DDP处理组中c-FLIP、NF-κB蛋白的表达水平高于TRAIL+5-FU处理组和TRAIL+DDP处理组。结论:1 TRAIL能诱导HEP-2、HNE-1细胞株的增殖,且与5-FU、DDP联合应用具协同抑制细胞株增殖的作用;2 TRAIL能诱导HEP-2、HNE-1细胞株的凋亡,且与5-FU、DDP联合应用能协同诱导HEP-2、HNE-1细胞株的凋亡;3在TRAIL联合化疗药物诱导HEP-2、HNE-1细胞株凋亡的过程中,可通过下调c-FLIP、NF-κB蛋白的表达,诱导细胞株的凋亡。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：TRAIL 联合化疗药物诱导HEP-2、HNE-1 细胞株凋亡的研究
• 前言
• 第一部分 TRAIL 联合5-FU、DDP 抑制HEP-2、HNE-1 细胞株增殖的研究
• 前言
• 1 实验材料和仪器
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第二部分 TRAIL 联合5-FU、DDP 诱导HEP-2、HNE-1 细胞凋亡的研究及可能机制的探讨
• 前言
• 1 实验材料和仪器
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附图
• 文献综述 TRAIL 与肿瘤的治疗
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的文章