DnaA蛋白不是大肠杆菌染色体复制起始的唯一调控因子

论文摘要

在大肠杆菌中,DNA分子是从环状染色体上唯一的复制原点oriC开始沿着两个方向复制,直到终点结束。整个复制过程是被严格调控的,因此在细胞的每个世代中染色体复制且只复制一次。将带有LacZ启动子的dnaA基因构建到pUC19中,得到重组质粒pUCA12。利用限制性内切酶SmaI和SacI对亚克隆载体pUCA12进行双酶切,将得到的Lac-dnaA片断插入到带有染色体oriC的微染色体pALO22中,得到重组微染色体pDnaA。利用IPTG对微染色体pALO22和pDnaA分别进行诱导,经过Western blotting和Southernblotting分析发现随着诱导时间的增加,DnaA蛋白的表达量在逐渐增加,微染色体pDnaA的拷贝数也逐渐增加,当pDnaA的拷贝数增加到微染色体pALO22拷贝数的4倍时,达到最大值。研究结果表明DnaA蛋白并不是调控oriC引发的DNA复制起始活动的唯一限制性因子。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文
• 引言
• 一、材料与方法
• （一） 材料
• 1.菌种和质粒
• 2.试剂
• 3.引物及探针
• （二） 方法
• 1.亚克隆载体pUCA12的构建
• 1.1 pLac-dnaA基因的PCR扩增
• 1.2 重组质粒的构建及筛选
• 1.3 重组质粒的检测
• 2.表达载体pDnaA的构建
• 2.1 重组微染色体的构建
• 2.2 重组微染色体的检测
• 2.3 重组微染色体的电击转化及筛选
• 3.Southern和Western检测
• 3.1 Southern检测
• 3.2 Western检测
• 二、结果与分析
• 1.亚克隆载体pUCA12的构建
• 2.表达载体pDnaA的构建
• 600生长曲线'>3.OD₆₀₀生长曲线
• 4.Southern杂交检测结果
• 5.Western杂交检测结果
• 三、讨论
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢