绞股蓝多糖对化学性肝损伤的保护作用

论文摘要

肝脏是腹腔内最大的实质性器官,担负着人体的重要生理功能。肝损伤是临床常见的症状,若医治不当会引发多种并发症,如感染、肝创面胆漏、继发性出血等,甚至导致肝纤维化、肝硬化及肝肿瘤等,严重危害人类的健康。目前,临床尚缺乏理想的特异性防治药物。绞股蓝Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）Makino（GP）为葫芦科绞股蓝属多年生草质藤本植物。现代药理学研究表明绞股蓝具有多种药理活性,如抗肿瘤、降血脂、降血糖、抗衰老等。但是目前的研究主要集中在绞股蓝皂苷上,对绞股蓝中其它成分则研究较少。在预实验的基础上,本课题对绞股蓝粗多糖进行了分离纯化,对绞股蓝多糖的结构和性质进行了分析,并分别以HL-7702细胞、大鼠肝原代细胞和小鼠为研究对象,通过四氯化碳和酒精肝损伤模型的建立,在细胞水平和动物水平上研究了绞股蓝多糖对化学性肝损伤的保护作用,测定给药后谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、丙二醛（MDA）、超氧化物岐化酶（SOD）或还原型谷胱甘肽（GSH）的活性,光镜下观察组织病理学变化。论文主要内容如下:1、绞股蓝多糖的分离纯化及其性质分析:绞股蓝粗多糖初步纯化之后,经DEAE-Sephrose离子交换柱、Superdex 200凝胶柱分离,收集各组分,再经Sephadex G-25脱盐,最后冷冻干燥得绞股蓝精制多糖GPS-2、GPS-3。我们继续对GPS-2、GPS-3的纯度、分子量等性质进行了初步研究。2、绞股蓝多糖对HL-7702细胞化学性肝损伤的保护作用:本课题以HL-7702细胞为研究对象,探讨GPS-2和GPS-3在细胞水平对肝损伤的保护作用。实验结果表明GPS-3对化学性肝损伤具有明显的保护作用,而GPS-2对化学性肝损伤的保护作用不明显。故在以后的实验中,只对GPS-3对化学性肝损伤的保护作用进行了研究。3、GPS-3对肝原代细胞化学性肝损伤的保护作用:由于HL-7702细胞为永生化的肝细胞株,虽然具有部分肝细胞的特性,但和正常肝细胞相比还是存在较大差异,故本章节以大鼠肝原代细胞为研究对象探讨GPS-3对肝损伤的保护作用。4、GPS-3对小鼠化学性肝损伤的保护作用:本章在动物水平继续探讨GPS-3对化学性肝损伤的保护作用,各生化指标和病理学切片图表明GPS-3具有明显的抗化学性肝损伤作用。综上所述可知,GPS-3在细胞水平和动物水平对化学性肝损伤都具有良好的保护作用,是一种具有广泛研究和开发价值的生物活性成分,其肝保护作用机制还有待进一步的研究。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 1 绞股蓝概况
• 1.1 绞股蓝的分布及科属
• 1.2 绞股蓝的化学成分及药理活性
• 1.2.1 绞股蓝皂苷药理活性研究
• 1.2.2 绞股蓝多糖药理活性研究
• 1.2.3 绞股蓝黄酮的药理活性研究
• 1.3 绞股蓝的临床应用及开发前景
• 2 化学性肝损伤
• 2.1 肝损伤与肝病
• 2.2 化学性肝损伤的作用机制
• 2.3 化学性肝损伤模型的建立
• 3 化学性肝损伤的治疗
• 3.1 氧自由基清除剂
• 3.2 肝药酶诱导剂
• 3.3 钙通道阻滞剂
• 3.4 肝细胞生长因子及肝细胞刺激因子
• 4 本课题的研究内容、意义和创新点
• 第一章 绞股蓝多糖的分离纯化及分子量测定
• 1 实验材料
• 2 试剂和仪器
• 3 实验方法
• 3.1 绞股蓝多糖的制备
• 3.2 绞股蓝多糖的分离
• 3.2 1 DEAE-Sephrose离子交换柱层析
• 3.2.2 凝胶柱层析分离
• 3.2.3 脱盐
• 3.3 绞股蓝多糖纯度检查
• 3.4 绞股蓝多糖分子量的测定
• 4 结果
• 4.1 绞股蓝粗多糖的制备
• 4.2 绞股蓝多糖的分离
• 4.2.1 DEAE-Sephrose离子交换柱层析
• 4.2.2 凝胶柱层析分离
• 4.2.3 脱盐
• 4.3 绞股蓝多糖纯度检查
• 4.4 绞股蓝多糖分子量的测定
• 5 讨论和总结
• 第二章 绞股蓝多糖对HL-7702细胞化学性肝损伤的保护作用
• 1 实验材料
• 2 试剂和仪器
• 3 方法
• 3.1 细胞培养
• 3.2 GPS-2和GPS-3对四氯化碳肝损伤的保护作用
• 4诱导培养HL-7702细胞损伤病理模型的制备'>3.2.1 CCL₄诱导培养HL-7702细胞损伤病理模型的制备
• 3.2.2 细胞的分组和药物的添加
• 3.2.3 细胞存活率检查
• 3.2.4 ALT、AST、MDA、SOD活性的测定
• 3.2.5 Hoechst33342细胞凋亡形态学染色
• 3.3 GPS-2和GPS-3对酒精性肝损伤的保护作用
• 3.3.1 酒精最佳损伤浓度的确定
• 3.3.2 药物的添加和酒精损伤
• 3.3.3 细胞存活率检查
• 3.3.4 ALT、AST、MDA、SOD活性的测定
• 4 结果
• 4.1 GPS-2和GPS-3对四氯化碳肝损伤的保护作用
• 4诱导培养HL-7702细胞损伤病理模型的制备'>4.1.1 CCl₄诱导培养HL-7702细胞损伤病理模型的制备
• 4.1.2 GPS-2和GPS-3对HL-7702细胞存活率的影响
• 4损伤后AST、ALT活性的影响'>4.1.3 GPS-2和GPS-3对CCl₄损伤后AST、ALT活性的影响
• 4损伤MDA和SOD活性的影响'>4.1.4 GPS-2和GPS-3对CCl₄损伤MDA和SOD活性的影响
• 4.1.5 Hoechst33342细胞凋亡形态学染色结果
• 4.2 GPS-2和GPS-3对酒精性肝损伤的保护作用
• 4.2.1 酒精最佳损伤浓度的确定
• 4.2.2 GPS-2和GPS-3对HL-7702细胞存活率的影响
• 4.2.3 GPS-2和GPS-3酒精损伤后AST和ALT活性的影响
• 4.2.4 GPS-2和GPS-3对酒精损伤后MDA和SOD活性的影响
• 5 讨论和总结
• 第三章 绞股蓝多糖对大鼠肝原代细胞化学性损伤的保护作用
• 1 实验材料
• 2 试剂和仪器
• 3 方法
• 3.1 药物及试剂的配制
• 3.2 鼠尾胶原的制备
• 3.3 培养板的预处理
• 3.4 大鼠肝细胞原代培养
• 4致肝原代细胞损伤的保护作用'>3.5 GPS-3对CCl₄致肝原代细胞损伤的保护作用
• 3.5.1 GPS-3对肝原代细胞的影响
• 4对肝原代细胞最佳损伤浓度和最佳损伤时间的确定'>3.5.2 CCl₄对肝原代细胞最佳损伤浓度和最佳损伤时间的确定
• 4致肝细胞损伤后细胞活力的影响'>3.5.3 GPS-3对CCl₄致肝细胞损伤后细胞活力的影响
• 4致肝细胞损伤后酶活力的影响'>3.5.4 GPS-3对CCl₄致肝细胞损伤后酶活力的影响
• 3.6 GPS-3对酒精致肝原代细胞损伤的保护作用
• 3.6.1 GPS-3对酒精致肝细胞损伤后细胞活力的影响
• 3.6.2 GPS-3对酒精致肝细胞损伤后酶活力的影响
• 4 结果
• 4.1 大鼠肝细胞原代培养
• 4.2 GPS-3对大鼠肝原代细胞的影响
• 4损伤的保护作用'>4.3 GPS-3对大鼠肝原代细胞CCl₄损伤的保护作用
• 4对肝原代细胞最佳损伤浓度和损伤时间的确定'>4.3.1 CCl₄对肝原代细胞最佳损伤浓度和损伤时间的确定
• 4致肝细胞损伤后细胞活力的影响'>4.3.2 GPS-3对CCl₄致肝细胞损伤后细胞活力的影响
• 4致肝细胞损伤后酶活力的影响'>4.3.3 GPS-3对CCl₄致肝细胞损伤后酶活力的影响
• 4.4 GPS-3糖对大鼠肝原代细胞酒精性肝损伤的保护作用
• 4.4.1 GPS-3对酒精致肝细胞损伤后细胞活力的影响
• 4.4.2 GPS-3对酒精致肝细胞损伤后酶活力的影响
• 5 总结和讨论
• 第四章 绞股蓝多糖对小鼠化学性肝损伤的保护作用
• 1 实验材料
• 2 试剂和仪器
• 3 实验方法
• 4肝损伤的保护作用'>3.1 GPS-3对CCl₄肝损伤的保护作用
• 4肝损伤模型的建立及给药'>3.1.1 CCl₄肝损伤模型的建立及给药
• 3.1.2 血清ALT、AST检测
• 3.1.3 肝脏组织中MDA及GSH检测
• 3.1.4 肝组织病理切片的制作
• 3.1.5 数据处理
• 3.2 GPS-3对酒精肝损伤的保护作用
• 3.2.1 酒精肝损伤模型的建立及给药
• 3.2.2 血清ALT、AST检测
• 3.2.3 肝脏组织中MDA及GSH检测
• 3.2.4 肝组织病理切片的制作
• 3.2.5 数据处理
• 4 结果
• 4肝损伤的保护作用'>4.1 GPS-3对小鼠CCl₄肝损伤的保护作用
• 4肝损伤小鼠血清ALT及AST活性的影响'>4.1.1 GPS-3对CCl₄肝损伤小鼠血清ALT及AST活性的影响
• 4肝损伤小鼠肝组织MDA及GSH活性的影响'>4.1.2 GPS-3对CCl₄肝损伤小鼠肝组织MDA及GSH活性的影响
• 4损伤后小鼠肝脏病理组织学变化的影响'>4.1.3 GPS-3对CCl₄损伤后小鼠肝脏病理组织学变化的影响
• 4.2 GPS-3对酒精性肝损伤小鼠的保护作用
• 4.2.1 酒精性肝损伤小鼠的一般情况观察及死亡率
• 4.2.2 GPS-3对酒精性肝损伤小鼠血清ALT及AST活性的影响
• 4.2.3 GPS-3对酒精性肝损伤小鼠肝组织MDA及GSH活性的影响
• 4.2.4 GPS-3对酒精致肝损伤后小鼠肝脏病理组织学变化的影响
• 5 总结和讨论
• 总结和展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的文章
• 学位论文评阅及答辩情况表