论文摘要
背景口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinoma, OSCC）约占所有口腔癌的90%以上,倾向于浸润性生长,易复发和颈部淋巴结转移。其原因可能与口腔组织血管、淋巴管、肌肉丰富,靠近神经纤维等因素有关,但是其分子生物学机制还不太清楚。OSCC的发生发展是多步骤、多基因共同作用的结果。近年来,与OSCC生物学行为相关的多种生物学指标受到关注。实际上,单靠传统的临床及病理因素难以准确判断OSCC的临床生物学行为,而且对于同一部位、同一临床分期的不同患者预后不尽相同的原因目前还不太清楚。因此,找到能够准确反映OSCC生物学行为的预后特征指标十分重要。研究目的运用流行病学方法分析口腔鳞状细胞癌的临床、病理学特点,研究HIF-1α、VEGF、p53. p21WAF1、MDM2. Ki-67等基因的表达及与OSCCI临床生物学特点之间的关系。研究方法1.回顾性分析2001年1月-2008年5月第二军医大学长征医院口腔科收治的55例OSCC患者的临床、病理资料。分组：根据OSCC发病部位分为唇癌（8例）、舌前癌（15例）、舌根癌（11例）、颊癌（10例）、牙龈癌（11例）5组；根据术前有无淋巴结转移进行1：1配比,有颈部淋巴结转移24例、无颈部淋巴结转移31例（唇癌组无转病例）；对所选病例进行随访,随访时间为术后5～98个月,其中失访6例,有效临床观察病例49例。在预后评价方面,本实验定义有术后局部复发或颈部淋巴结转移为预后差。病例资料分析方法：对发病部位、术前淋巴结转移情况、性别、年龄、肿瘤病理分级、术后局部复发与淋巴结转移情况进行流行病学分析；统计学方法：等级资料采用卡方检验；采用Kaplan-Meier生存分析法及Logrank检验进行单变量分析,同时分别计算术后1-5年的复发转移率。2.采用免疫组化EnVisionTM法检测HIF-1αVEGF. p53、p21WAF1、MDM2、Ki-67在OSCC中的蛋白表达,病理读片,定性分析各基因的表达情况,免疫组化结果采用二级计分法,根据染色强度及阳性细胞的数目进行计分并取平均值（Mean score, MS）定量化处理,分析不同部位OSCC,不同分化程度、术前淋巴结转移与否、不同预后等情况各基因蛋白表达的差异性。统计方法：根据资料方差齐性检验的结果,分别采用完全随机秩和检验（Kruskal Wallis Test）. Mann-Whitney检验或者单因素方差分析（One-way ANOVA）。3.对6基因的蛋白表达水平定性、定量数据资料进行指标聚类分析（Variables clustering analysis）,同时采用Pearson或Spearman法进行基因表达的相关性分析,筛选相关的基因；进一步分析筛选出来的HIF-lα、VEGF基因的表达及其相关性与OSCC分化、转移、预后等生物学行为指标的关系,研究多基因表达在OSCC中的临床意义。结果1.临床资料分析结果49例有效OSCC病例中,高分化27例,中低分化22例；OSCC,总体局部复发、淋巴结转移率为38.6%,各部位复发转移率：舌根部最高为54.5%,牙龈部45.5%,颊癌37.5%,舌前部35.7%,唇癌为0.0%；术前淋巴结转移情况、肿瘤组织分化程度对预后有显著性影响,术前有淋巴结转移组的术后复发转移率为56.5%,高于无淋巴结转移组（23.1%）（P<0.05）,中低分化组的术后复发转移率为54.5%,高于高分化组（25.9%）（P<0.05）；中低分化合并术前颈部淋巴结转移时,其术后复发转移率高达83.3%,成倍高于其他各组复发转移率（P<0.05）: OSCC的分化、预后与年龄、性别无显著性关系；经KaPlan-Meier生存分析法分析术后1-5年的复发转移率,复发或转移主要发生在术后前两年。2. HIF-1a. VEGF、p53. p21WAF1、MDM2. Ki-67的蛋白表达2.1 HIF-1a的蛋白表达的阳性率为69.1%, VEGF的蛋白表达的阳性率为40%,p53为78.2%, MDM2为85.5%, P21WAF1为96.4%,Ki-67为83.6%。2.2 HIF-1a的表达在不同发病部位之间有显著性差异（P<0.05）; HIF-1a在牙龈癌中的表达水平是其他部位OSCC表达水平的2-9倍。2.3 VEGF在舌癌和牙龈癌中的表达较高,其表达水平可能与OSCC的淋巴结转移有关,预后差组VEGF的表达高于预后好组,但无统计学意义；VEGF在牙龈癌中的表达水平与中低分化正相关。3. HIF-1a、VEGF等基因协同作用与OSCC生物学行为相关性分析结果经指标聚类分析发现HIF-1α、VEGF聚为一类,p53. Ki-67. p21WAF1聚为一类,MDM2单独为一类；55例OSCC中HIF-1α、VEGF蛋白表达呈正相关关系,r=0.3（P<0.05）。进一步分析发现,HIF-1α、VEGF的表达与OSCC术前淋巴结转移有正相关关系,尤其与舌癌、颊癌的淋巴结转移关系密切；与OSCC中低分化正相关；与舌前、颊、牙龈的不良预后有显著的正相关关系；在小于或等于55岁组、男性组均有正相关性。就舌癌而言HIF-1α、VEGF的高表达与舌前癌的淋巴结转移、中低分化呈高度正相关,相关系数均大于0.95,但在舌根癌中HIF-1α、VEGF的高表达与淋巴结转移之间可能有关,但本组资料无统计学意义,其表达与分化程度无关。HIF-1α、VEGF的表达与高分化组、术前无淋巴结转移组、预后差组、女性组、>55岁组无相关性（P>0.05）。结论颈部淋巴结转移和中低分化对口腔鳞状细胞癌的预后不利,特别是中低分化OSCC同时伴有淋巴结移者,预后很差（术后复发转移率达83.3%）,对颈部淋巴结转移或（和）中低分化OSCC患者应加强随访,尤其是术后前两年。我们认为HIF-1α、VEGF共同表达与OSCC的术前淋巴结转移、中低分化、预后密切相关,尤其在狭义口腔癌,这种关系更显著。对两者相关性的分析或许能为临床诊断、治疗提供新的研究方向。