论文摘要
[背景与目的]肥胖症是一个世界范围内的健康难题。饮食、药物和行为疗法对部分患者有效但疗效难以维持。外科手术治疗（如胃囊带术或分流术）,尽管对有些肥胖患者有效,但创伤大、副反应多。寻求创伤小、便捷有效的减肥方法是目前医学科学的努力方向。近年有学者提出将A型肉毒毒素（BTX-A）应用于肥胖治疗领域具有诸多优势,受到人们的热切关注。少许报道认为,BTX-A胃壁注射可以导致摄食减少,体重下降,这一结果可能通过抑制胃排空和食欲的途径而实现。国内刘庆森教授率先将BTX-A应用于肥胖治疗领域,初期研究取得了肯定疗效。但具体机制仍不清楚。本课题通过胃壁肌层不同点位注射BTX-A,并在不同时间段内系统观察BTX-A胃壁注射对大鼠胃动力、胃Cajal间质细胞以及脑肠肽ghrelin、NPY、PYY表达的影响,旨在深入探索BTX-A胃壁注射法治疗肥胖症的分子机制。[方法]将72只雄性Wistar大鼠随机分为三批（2周,6周,12周）,每批24只。每批再分为4组（对照组、胃窦BTX-A组、胃底体BTX-A组、全胃多点BTX-A组）,每组6只。每只大鼠剖腹后暴露胃,在胃壁肌层分别注射BTX-A或生理盐水,术后单笼饲养,跟踪记录大鼠的摄食量和体重至12周,分别于术后2周、6周、12周时进行胃动力检测并留取标本。实验参数包括两部分：一为胃动力相关部分：核素扫描胃固体半排空时间的测定；胃肌电图描记；Cajal间质细胞（ICC）免疫组化测定及半定量分析；ICC透射电镜观察。二为脑肠肽相关部分：酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆ghrelin、PYY浓度；免疫组化法检测胃ghrelin、下丘脑NPY的表达；Western blotting法检测胃ghrelin的半定量表达；实时荧光定量PCR （RT-qPCR）法检测ghrelin-mRNA、下丘脑NPY-mRNA的相对定量表达。[结果]1.BTX-A注射组与对照组比较,大鼠摄食量减少,体重减低。2.BTX-A胃壁注射对胃动力的影响BTX-A注射组胃固体半排空时间（T1/2）较对照组明显延长。BTX-A组胃电图可见胃动过缓、节律紊乱。并且胃ICC表达数目减少,ICC网络结构紊乱。3. BTX-A胃壁注射对脑肠肽的影响：在BTX-A注射组,血浆ghrel in浓度降低,血浆PYY浓度升高；通过免疫组化、Western blotting、RT-qPCR等方法发现,在蛋白质和mRNA水平,BTX-A组ghrelin和NPY的表达均较对照组明显降低。4.在BTX-A注射的3个组中观察,均发现胃排空延缓、胃电节律失常,以及ICC、ghrelin、NPY的表达下降,上述参数的改变,以多点组最为明显,其次为胃底组,再次为胃窦组。在BTX-A注射后不同时间段观察,BTX-A组与对照组的差异性,以注射后2周最为明显,其次为6周,再次为12周。[结论]1.胃壁注射BTX-A,使ICC的发育成熟障碍,从而影响胃肌电正常慢波的形成和扩布,造成胃电节律减缓和紊乱,延缓胃排空。这可能是造成大鼠摄食减少、体重下降的重要机制之一2.胃壁注射BTX-A,下调了促食因子（ghrelin和NPY）的表达,上调了抑食因子（PYY）的表达。这也是导致大鼠摄食和体重减少的机制之一3.在胃的不同部位注射BTX-A产生的效果不同,以全胃多点注射BTX-A对大鼠摄食和体重减低的作用表现得最为显著。在3个不同时间段分别与对照组比较,在2周时BTX-A组效果最为显著,持续至12周时仍有一定效果,故认为,BTX-A的抑食、减重作用在短期内（12周）效果明显。在本课题中,我们探讨了应用BTX-A治疗肥胖症的可能分子机制,为该法更合理地应用于临床提供了更全面可靠的理论依据。