论文摘要
第一部分 PCR-RFLP方法检测IL-6基N启动子区-634C/G多态性的实验条件研究 [目的] 探讨聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测白细胞介素-6（IL-6）基因启动子区-634C/G多态性的最适实验条件。方法 对影响PCR的部分因素和影响RFLP方法的一些因素进行了研究。结果 （1）随着Taq酶量增加,产物量也增加,但Taq酶量大于1.5U时,产物量不再增加;（2）引物浓度是0.21μmol/L时,PCR产物量高且引物二聚体较少;（3）产物量随dNTP浓度的增加而增加,但超过120μmol/L后产物量并无变化;（4）Mg2+浓度在1.5～2.5mmol/L时,扩增结果较为理想,5mmol/L的Mg2+浓度反而使扩增产物量降低;（5）4μl的PCR产物进行酶切,电泳结果清晰可辨;（6）2.5U的限制性内切酶可完全切开4μl的扩增产物;（7）酶切时间超过9小时能完全消化PCR产物。结论PCR扩增IL-6基因启动子区的最适条件为:引物浓度为0.21μmol/L;Taq酶量为1.5U;dNTP浓度为120μmol/L;Mg2+浓度为2.0mmol/L。最经济有效的酶切体系为20μl体系中加4μl产物用2.5U的酶消化9小时以上。
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