抑癌基因AZGP1在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义和功能的初步研究

论文摘要

研究背景和目的食管癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一,具有明显的地区性分布差异,预后不佳。在我国食管癌死亡率高,并且病理类型主要以鳞状细胞癌为主。我国高发区主要集中在太行山脉区域的河南边境、山西和河北交界区。发病率由高到低向四周放射状。近年来随着外科、放疗和化疗等多学科统合治疗食管癌取得不少进展,但其总体5年存活率仍较低。研究表明食管鳞癌的发生发展与环境、生活习惯、营养状况等密切相关。涉及一个或者多个基因多阶段、多步骤的过程,其中癌基因的启动与抑癌基因的失活是非常重要的两个方面,研究表明多个与肿瘤相关的基因也与食管鳞癌的发生发展密切相关。因此,研究与食管癌相关基因及其作用,对食管癌的诊断、治疗及指导预后具有重要意义。为了研究河南林州市地区食管鳞癌的癌变及转移相关因子,通过在林州市人民医院收集了包含肿瘤和癌旁正常组织的石蜡包埋标本299例,建立了一套包含临床病理数据的食管鳞状细胞癌的组织芯片。通过选取10对分别包含新鲜食管鳞癌和邻近正常食管上皮组织标本,抽提RNA,并分别等量混匀在一起。采用cDNA芯片检测表达谱并进行比较,寻找到有表达差异的基因。通过基因的表达差异,发现肿瘤组织的AZGP1表达含量是其相应邻近组织的-3.3倍。其在肿瘤组织中表达明显下调。AZGP1是一种可溶性糖蛋白,有很多文献报道在肿瘤恶病质患者中AZGP1高表达,有些文献报道其可以作为一种生物标记,同时有报导在胰腺癌中表达是下降的。但未见文献报导AZGP1在食管鳞状细胞癌发生发展中的作用。材料和方法：1.55例食管癌手术切除标本取自河南省安阳肿瘤医院,HE切片病理证实为鳞状细胞癌。所有病例术前均无化疗、放疗及免疫治疗史。2.构建食管癌组织芯片包括299例食管癌组织样本,其中包括166名男性和133名女性患者；年龄从40岁至80岁,平均年龄为59.8岁。其中Ⅰ期病人12名,ⅡA期病人145名,ⅡB期病人30名,Ⅲ期病人98名,Ⅳ期病人9名,其中有淋巴结转移的病人135名,原位癌5名。肿瘤的分级根据WHO分级标准,TNM分期参照UICC第6版TNM的分期标准（2002年）。3.通过RT-PCR方法检测55例食管鳞状细胞癌组织及其对应正常的癌旁组织中AZGP1mRNA的表达情况。免疫组化方法检测食管癌组织芯片中AZGP1蛋白表达差异。4.将AZGP1基因克隆并连接到载体pcDNA3.1（+）并转染到表达缺失的细胞株KYSE30。RT-PCR检测转染KYSE30细胞中AZGP1mRNA表达情况；western-blot检测转染KYSE30细胞中AZGP1蛋白表达情况。5.细胞增殖实验、平板克隆形成实验、裸鼠荷瘤实验研究AZGPl对食管癌细胞株的抑瘤能力研究。6.通过划痕实验了解AZGPl对于细胞迁移能力的影响。结果1.AZGP1基因在55例食管鳞癌标本中mRNA表达情况,AZGP1在食管鳞癌组织中表达缺失率为69.09%（38/55）.免疫组化在蛋白质水平上检测临床病理标本发现食管鳞癌中低表达或不表达率为70.4%（202/287）,在所有正常鳞状上皮组织中高表达。与肿瘤分化、肿瘤分期密切相关。2.AZGP1表达与临床预后密切相关。3.细胞增殖实验、平板克隆形成实验、裸鼠体内荷瘤实验等均证明AZGP1能抑制ESCC细胞的成瘤能力。4.划痕实验证明AZGP1能够抑制肿瘤细胞迁移和侵袭。5.免疫印记提示AZGP1在转染食管鳞癌细胞中表达,MET相关标记Vimentin表达下降,E-cadherin表达上升。结论1.食管鳞癌组织中AZGP1表达下调,与食管鳞癌分化程度、分期密切相关,提示AZGP1可能参与食管鳞状细胞癌的发生发展过程。2.通过功能实验初步研究,能够抑制肿瘤生长、抑制EMT转化,有可能成为食管鳞癌治疗的新靶点。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 附录
• 参考文献
• 综述 候选抑癌基因AZGP1在肿瘤中作用研究进展
• 参考文献
• 在学期间发表的论文
• 致谢