鬼臼毒素促放线菌酮诱导细胞凋亡及其与PKCδ的关系

论文摘要

放线菌酮是一个典型的真核生物蛋白合成抑制剂,能抑制不同刺激物诱导的细胞凋亡,被广泛应用于细胞凋亡的分子机制研究。由于它具有选择性诱导特定细胞系凋亡的能力,并对耐药现象有一定抑制作用,因此我们将其应用于抗癌药物的筛选。本论文首先对放线菌酮和鬼臼毒素叠加作用时诱导 U937 细胞凋亡的相互关系进行了研究。通常情况下放线菌酮可通过阻断新蛋白的合成来抑制鬼臼毒素等诱导的细胞凋亡,而我们发现鬼臼毒素能明显的促进放线菌酮诱导的细胞凋亡,却不改变它原有的细胞系选择性,这提示将两者叠加作用时可以获得高效并具有细胞选择性的凋亡诱导效果,为开发新的高效低毒抗肿瘤药物体系提供理论基础。此外,本论文对鬼臼毒素促进放线菌酮诱导 U937 细胞凋亡的分子机制进行了探讨。由于放线菌酮抑制大部分蛋白质合成的过程很可能与蛋白激酶 cδ的磷酸化激活、进而活化相关 caspases 有关,所以本实验通过对蛋白激酶 cδ磷酸化的检测证实了在鬼臼毒素和放线菌酮共加时,蛋白激酶 cδ磷酸化水平有很大提高,而用蛋白激酶 cδ选择性抑制剂阻断这种磷酸化的形成后,细胞凋亡率回复到放线菌酮单独使用的水平,细胞色素 c 在期间没有明显变化。关于鬼臼毒素作用下蛋白激酶 cδ磷酸化并剪切活化后,如何激活下游蛋白并最终促进放线菌酮诱导 U937 细胞凋亡还有待进一步研究。

论文目录

• 第一章 引言
• 1.1 课题背景及意义
• 1.2 细胞凋亡的研究进展
• 1.2.1 细胞凋亡的形态学特征
• 1.2.2 细胞凋亡的分子生物学基础
• 1.2.3 两条主要的凋亡信号通路
• 1.2.4 蛋白激酶cδ与细胞凋亡
• 1.3 白血病的治疗现状
• 1.3.1 白血病的特点
• 1.3.2 白血病的治疗
• 1.3.3 化疗的不足
• 1.4 论文各部分的主要内容
• 第二章 实验材料与实验方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验所用仪器
• 2.1.2 实验所用药物和溶液配制
• 2.1.2.1 实验药物
• 2.1.2.2 溶液配制
• 2.1.3 细胞培养
• 2.1.3.1 细胞复苏和冻存
• 2.1.3.2 细胞接种
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 细胞凋亡核片断化检测
• 2.2.2 BCA 法测蛋白质含量
• 2.2.3 免疫印迹
• 2.2.4 统计学分析
• 第三章 鬼臼毒素促放线菌酮诱导U937细胞凋亡
• 3.1 VP-16 促进CHX 诱导的细胞凋亡是 PKCδ依赖的
• 3.2 PKCδ的活化情况
• 3.3 CHX 和 VP-16 对总细胞色素c 的影响
• 3.4 总结与讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢与声明
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果