论文摘要
目的:结直肠癌（colorectal cancer, CRC）是胃肠道中常见的恶性肿瘤之一,居全球恶性肿瘤发病率的第3位[1]。在世界范围内其发病率及死亡率呈明显上升趋势。虽然采用手术、放化疗、免疫治疗等综合性治疗措施,其预后仍不容乐观,五年生存率约50%左右,多数病人最终死于局部复发及远处转移。据报道,60%以上的恶性肿瘤患者于初次诊断时己发现有转移。侵袭和转移是临床肿瘤患者的主要死因。结直肠癌的复发、转移问题,已成为影响结直肠癌治愈率及改善患者生存质量的关键因素。研究结直肠癌的早期诊断方法,寻找监测其复发、转移和预后的灵敏指标对结直肠癌诊治具有重要意义。肿瘤的侵袭和转移是涉及众多细胞内和细胞外因子的复杂过程。通过改变细胞-细胞、细胞-基质的黏附特性及重组actin细胞骨架促使肿瘤细胞迁移[7]。Fascin是能与F-肌动蛋白结合的一种细胞骨架蛋白,其功能涉及细胞黏附和运动性,具有聚集actin成束、促使细胞膜突形成、并通过增加正常和转化上皮细胞的运动性来调节细胞运动的功能。Fascin在正常上皮组织低表达或不表达,而在若干侵袭性表型上皮性肿瘤中表达上调。它以两种形式表达:一种是组成肌动蛋白的相关结构,介导细胞的位移、细胞间相互作用;另一种是组成细胞质微丝束从而有助于细胞骨架形成和细胞内的运动。E-cadherin有抑制肿瘤浸润转移功能,E-cadherin黏附特性的改变也可能导致细胞骨架的重排,从而促进肿瘤的浸润转移[3]。E-cadherin和fascin在转化的上皮细胞中具有密切关系[6]。趋化因子是一组具有趋化作用的细胞因子,趋化因子CXCL12与其唯一受体CXCR4结合后,能够导致肌动蛋白聚合和细胞伪足形成[4],促使癌细胞突破基底膜发生侵袭、运动和远处转移,从而产生趋化运动和侵袭反应。目前,有关fascin、E-cadherin、CXCR4和CXCL12单独在乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌、胃癌等恶性肿瘤中的研究报道偶见,但在结直肠癌中的研究较少,特别是fascin、E-cadherin、CXCR4和CXCL12同时在结直肠癌的研究及其在淋巴结转移中的相互作用国内外尚未见报道。本研究采用免疫组化方法探讨正常结直肠黏膜组织、结直肠癌组织及对应淋巴结转移癌组织中fascin、E-cadherin、CXCR4和CXCL12的表达情况,以期进一步阐明结直肠癌淋巴结转移的分子机制,寻找监测其区域淋巴结转移的灵敏指标,为结直肠癌的临床早期诊断、预后及治疗提供依据。方法:采用免疫组织化学（EnVisionTM plus两步法）检测20例正常结直肠黏膜组织、126例结直肠癌组织,（其中57例伴有淋巴结转移）及与有转移原发灶对应的区域淋巴结转移癌中fascin、E-cadherin、CXCR4、CXCL12的表达情况,分析其在结直肠癌淋巴结转移中表达的可能意义及其相互关系。结果:1 Fascin蛋白的表达情况:免疫组化检测,Fascin蛋白在17例正常肠黏膜上皮细胞几乎不表达,仅有3例呈弱阳性表达,但在固有层中微血管内皮细胞、淋巴细胞及间质细胞中呈阳性表达。Fascin在20例正常结直肠黏膜组织的阳性表达率为15%（3/20）,而126例结直肠癌组织中阳性表达率为47.62%（60/126）,明显高于正常粘膜组织（P<0.05）;57例淋巴结转移癌组织中fascin的阳性表达率为75.44%（43/57）,明显高于其对应的原发灶癌组织57.89%（43/57）（P<0.05）。在结直肠癌中,随淋巴结转移的发生、组织学分级的增高及临床分期的进展,fascin蛋白的阳性表达率均明显增高（P<0.05）。Fascin在低分化腺癌中的表达明显高于高分化和中分化腺癌（p<0.05）。另外,结直肠组织fascin的阳性表达与大体类型密切相关（P<0.05）。除此之外,在结直肠癌中fascin与其它病理参数之间无明显相关性（P<0.05）。2 E-cadherin蛋白的表达情况免疫组化检测发现,E-cadherin在正常大肠粘膜中几乎全部上皮细胞膜呈强阳性表达,在细胞相邻的侧面呈连续线状,具有明显的同质性和极性。在结直肠癌组织中,其表达明显下降或缺失,或呈异质性表达（点状、间断状、小团状胞浆着色） ,且明显丧失极性（各方向均可见着色）。粘液腺癌、印戒细胞癌和未分化腺癌细胞基本无表达。在126例结直肠癌组织中E– cadherin的阳性表达率为18.25%（23/126）,明显低于20例正常结直肠上皮组织的阳性率80%（16/20）（P<0.05）;在淋巴结转移癌组织中E–cadherin的阳性表达7.02%（4/57）与其相应原发癌的阳性表达8.77%（5/57）无明显差异（P>0.05）。结直肠癌组织中E-cadherin表达与淋巴结转移密切相关,有转移组中的阳性表达率明显低于无转移组（P<0.05）;随结直肠癌组织学分级的升高,E-cadherin表达率呈降低趋势,E-cadherin在低分化结直肠癌中的阳性表达率明显低于中分化组及高分化组者（P<0.05）。而未发现E-cadherin的表达与年龄、性别、浸润深度等其它病理特征之间有关联性（P<0.05）。3 CXCR4的表达情况免疫组化研究结果表明,结直肠癌组织中CXCR4的阳性表达率为58.73%（74/126）,明显高于正常结直肠黏膜的阳性表达率35%（7/20）（P<0.05）。淋巴结转移癌中的CXCR4阳性表达率为82.46%（47/57）,明显高于其相应的原发癌中的表达49.12%（28/57）（P<0.05）;结直肠癌组织CXCR4的阳性表达率与转移密切相关,转移组中CXCR4的阳性表达率明显高于无转移组（P<0.05）。但与其它临床病理特征之间无明显差异（P>0.05）。4 CXCL12的表达情况CXCL12在126例结直肠癌组织中表达率83.33%（105/126）,明显高于20例正常结直肠黏膜35%（7/20）（P<0.05）;淋巴结转移癌的CXCL12表达率94.74%（54/57）明显高于其相应的原发癌82.46%（47/57）（P<0.05）。结直肠癌组织中CXCL12表达水平与患者年龄、性别、肿瘤所在部位、肿瘤大小、大体类型、浸润深度、病理分化程度、淋巴结转移、病理组织分型及临床分期等临床病理参数之间无相关性（P>0.05）。5结直肠癌组织fascin与E-cad、CXCR4及CXCL12表达的相关关系结直肠癌中fascin与E-cadherin间阳性表达存在明显的负相关关系（r=-0.204,P=0.022）。fascin与CXCR4,fascin与CXCL12间的阳性表达呈明显的正相关关系（r=0.186,P=0.037;r=0.213,P=0.017）。结论:1 Fascin、CXCR4和CXCL12在结直肠癌组织中的表达明显高于正常结直肠组织,且在淋巴结转移癌中的表达也高于相应结直肠原发癌组织,而E-cadherin的表达特征则与上述三种标志物相反。2在结直肠癌组织中fascin、E-cadherin、CXCR4及CXCL12的表达均与淋巴结转移和组织学分级密切相关。3研究结果提示fascin、E- cadherin、CXCR4及CXCL12均可能在结直肠癌的发生发展及淋巴结转移过程中发挥一定作用。