油橄榄叶中羟基酪醇的提取纯化及抗氧化性研究

论文摘要

油橄榄叶含有黄酮类、木酚素类、橄榄苦苷等多种抗氧化活性物质,由橄榄苦苷转化生成的羟基酪醇（HT）具有抗菌、消炎、防止动脉粥样硬化等多种保健作用,对于开发利用油橄榄叶资源具有重要意义。本论主要研究了橄榄苦苷转化为HT的工艺,并对其提取和纯化条件及其抗氧化性质和降脂作用进行了初步研究。采用盐酸和p-葡萄糖苷酶分别水解橄榄叶提取物制备羟基酪醇。通过单因素试验和正交试验得出了酸水解的较优参数为：时间6h、温度80℃、盐酸浓度为0.2mol/L.液料比为50:1（mL/g）。酶水解的最佳工艺参数为：温度50℃、时间4h、pH7.0、加酶量25U/mg（橄榄叶提取物）。通过酶解的方法羟基酪醇最高得率为3.91%,而酸解的羟基酪醇最高得率为7.38%。从生产成本和羟基酪醇得率考虑,盐酸法优于酶法。在单因素实验基础上,采用Box-Behnken中心组合设计原理研究从橄榄叶中提取羟基酪醇的工艺。以羟基酪醇得率为响应值利用Design Expert7.0软件得到回归方程的预测模型并进行响应面分析确定羟基酪醇的最佳提取条件为：液料比50.74:1（mL/g）,提取温度92.39℃,盐酸浓度0.14mol/L,提取时间6.02h。该条件下羟基酪醇的得率为0.580%。通过对几种大孔吸附树脂的比较,选出DM-2型大孔吸附树脂对羟基酪醇进行纯化。纯化后可以得到羟基酪醇含量为66%的黄色膏状体,富集倍数为6.5。比较了不同浓度下,羟基酪醇、Vc、橄榄叶提取物、白藜芦醇的还原能力、清除羟自由基能力以及清除DPPH·的能力。实验结果表明HT具有较强的体外抗氧化活性,清除DPPH自由基的能力超过了Vc。通过动物实验可知,羟基酪醇可以在一定程度上降低高血脂症小鼠的血脂水平。摄入一定剂量的羟基酪醇可以显著降低高血脂症小鼠血清中TC、TG含量,升高HDL-C含量,羟基酪醇能使高脂饮食小鼠肝脏的总抗氧化能力水平升高,MDA含量降低,SOD活性增加,从而达到抗氧化作用效果。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 油橄榄的综合利用和研究进展
• 1.1.1 油橄榄的主要有效成分
• 1.1.2 油橄榄的开发价值
• 1.2 羟基酪醇的研究概况
• 1.2.1 羟基酪醇概述
• 1.2.2 羟基酪醇的抗氧化活性
• 1.2.3 国内外对于生产羟基酪醇的研究
• 1.2.4 羟基酪醇的检测
• 1.3 自由基与疾病、衰老
• 1.3.1 自由基
• 1.3.2 氧自由基毒性
• 1.4 抗氧化剂作用机理及研究方法
• 1.4.1 抗氧化剂作用机理
• 1.4.2 抗氧化研究方法
• 1.5 高脂血症现状与治疗
• 1.5.1 高脂血症的定义
• 1.5.2 引起高脂血症的原因及其分类
• 1.5.3 高脂血症的危害
• 1.5.4 高脂血症的药物治疗
• 1.6 本课题的研究目的和主要内容
• 1.6.1 研究主要目的与意义
• 1.6.2 研究的主要内容
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 主要仪器
• 2.3 主要试剂
• 2.4 盐酸法和B-葡萄糖苷酶法水解橄榄叶提取物制备羟基酪醇的比较
• 2.4.1 橄榄叶提取物的酸解方法
• 2.4.2 橄榄叶提取物的酶解方法
• 2.4.3 羟基酪醇的检测
• 2.4.4 酸法和酶法水解橄榄叶提取物单因素实验
• 2.4.5 最佳工艺参数的确定
• 2.5 油橄榄叶中羟基酪醇的提取工艺条件研究
• 2.5.1 盐酸法从油橄榄叶中提取羟基酪醇的单因素实验
• 2.5.2 优化羟基酪醇提取的响应面实验
• 2.6 大孔吸附树脂纯化羟基酪醇粗提液
• 2.6.1 树脂种类的筛选
• 2.6.2 DM-2大孔吸附树脂纯化条件的确定
• 2.7 羟基酪醇与其他物质体外抗氧化能力的比较
• 2.7.1 铁氰化钾法对还原能力的测定
• 2.7.2 清除OH·的效果测定
• 2.7.3 清除DPPH·能力的测定
• 2.8 羟基酪醇对高血脂小鼠降血脂作用的研究
• 2.8.1 实验动物
• 2.8.2 高脂饲料的配方
• 2.8.3 实验动物的分组
• 2.8.4 高血脂症模型的建立
• 2.8.5 检测指标及方法
• 2.8.6 数据处理
• 3 结果与讨论
• 3.1 盐酸法和β-葡萄糖苷酶法水解橄榄叶提取物的比较
• 3.1.1 盐酸法水解橄榄叶提取物制备羟基酪醇单因素实验结果
• 3.1.2 酸解条件的优化
• 3.1.3 酶解单因素实验结果
• 3.1.4 酶解条件的优化
• 3.1.5 橄榄叶提取物水解前后HPLC图谱
• 3.2 响应面法优化从油橄榄叶中提取羟基酪醇的条件
• 3.2.1 单因素实验
• 3.2.2 响应面法优化HT提取条件
• 3.3 大孔吸附树脂纯化羟基酪醇的研究
• 3.3.1 吸附树脂种类筛选结果
• 3.3.2 DM-2初步纯化HT提取液条件的确定
• 3.4 羟基酪醇体外抗氧化活性的研究
• 3.4.1 还原能力测定结果
• 3.4.2 清除OH·的测定结果
• 3.4.3 清除DPPH自由基能力的测定结果
• 3.5 羟基酪醇对高血脂症小鼠降脂作用的研究
• 3.5.1 各组实验动物体重的变化
• 3.5.2 HT对小鼠血清水平的影响
• 3.5.3 HT对小鼠肝脏抗氧化水平的影响
• 4 结论
• 4.1 盐酸法和B-葡萄糖苷酶法水解橄榄叶提取物制备羟基酪醇的比较
• 4.2 响应面法优化油橄榄叶中羟基酪醇提取条件
• 4.3 大孔吸附树脂纯化羟基酪醇粗提液
• 4.4 羟基酪醇和其他三种样品体外抗氧化实验
• 4.5 羟基酪醇对高血脂小鼠降血脂作用的研究
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 硕士期间发表论文情况
• 8 致谢