论文摘要
随着生物技术的发展和成熟,人们逐渐将基因操作对象由微生物和植物转向了动物。在各种生物技术中,转基因技术是一项有效地改变动物性状的手段。通过转基因操作,人们可能对动物进行定向改造,或者培育出新的品种。转基因动物及转基因动物产品以其诱人的经济前景,显示出强大的生命力,其市场化将是不可扭转的时代趋势。然而,鉴于生物安全问题,转基因动物生产的各个环节都需受到严格的控制。因此,一套健全、科学、规范的安全评价体系是必不可少的。其中,可靠、准确的转基因检测方法是安全评价体系中的重要环节。一般说来,转基因动物检测可以从核酸和蛋白质两个水平进行。由于蛋白质是基因表达的最终产物,往往也是发挥功能的物质。因此,从蛋白质水平对转基因动物进行检测,不仅能够反映外源基因的整合情况,还能显示基因的表达情况,而且蛋白检测存在着一定的简便性优点。所以,本研究以转人乳铁蛋白（human lactoferrin, hLF）牛奶为检测对象,利用多种蛋白检测的方法,包括SDS-PAGE. Dot blot、Western blot、ELISA、胶体金免疫层析,对牛奶中的hLF蛋白进行了定性定量检测,主要结果如下：1.采用SDS-PAGE、Dot blot和Western blot方法,对牛奶样品进行定性检测。结果发现,这3种方法得到的结果一致,表明它们均能有效地区分转基因与非转基因牛奶；2.建立了间接型化学发光ELISA检测方法,其线性检测范围为6.4×10-7mg/mL～2×10-3mg/mL,并以此方法对3份转基因牛奶进行了定量测定,hLF的浓度分别为1.31mg/mL、9.12mg/mL和8.11mg/mL；3.分别以金标hLF和金标多克隆抗体为示踪物,初步研发出2种竞争型胶体金免疫层析试纸条,实现了快速检测的要求,得到了与常规检测方法一致的检测结果；本研究采用了多种蛋白质检测方法,对牛奶样品中的hLF进行了定性定量检测。通过将各结果对比发现,各检测方法得到的结果一致,均可作为牛奶中hLF检测的有效方法。其中,ELISA方法的检测限为6.4×10-7mg/mL。