西洛他唑对全脑缺血大鼠海马神经元凋亡的保护作用及p-Akt表达的影响

论文摘要

目的：观察西洛他唑对全脑缺血大鼠海马神经元凋亡的保护作用，并进一步探讨西洛他唑脑保护作用的机制。方法：采用改良的Pulsinelli 4血管闭塞法（4-VO）制作大鼠全脑缺血再灌注模型，应用脑电图检测模型是否成功。将184只（模型成功率为75％，死亡后补充动物）300g左右的健康成年Sprague-Daewley（SD）大鼠随机分为3组：假手术组（n=8×2）、缺血再灌注组（n=8×9）及治疗组（n=8×9）。其中，缺血再灌注组和治疗组大鼠分别于全脑缺血10min再灌注0，1，12，24，72h和7d断头取脑，假手术组大鼠于再灌注0h断头取脑。治疗组于缺血前6h和2h各灌胃给予一次西洛他唑，剂量为30mg／kg，以后每隔24h在相应时间点给药，其它各组灌胃给予等量二甲基亚砜。鼠脑灌注及固定后制作石蜡切片，做caspase-3免疫组化的脑组织制作冰冻切片。HE染色观察缺血再灌注24、72h、7d大鼠海马CA1区神经元的病理变化；免疫组织化学（SP方法）及Image-ProPlus5.0图像分析处理系统进行计算缺血再灌注0、1、12h大鼠海马CA1区p-Akt的平均光密度值；免疫组织化学（SP方法）观察缺血再灌注24、72h、7d大鼠caspase-3阳性细胞数。另外再取24只大鼠随机分为3组：假手术组（n=8）、缺血再灌注组（n=8）及治疗组（n=8），应用Morris水迷宫对全脑缺血再灌注7d的大鼠进行缺血后学习和记忆功能的测定。结果：1．HE染色结果：在海马CA1区，假手术组未见神经元坏死。与假手术组相比，缺血再灌注组再灌注24h海马CA1区有15％锥体细胞体积缩小、核不规则、深染；再灌注72h有54％锥体细胞损伤严重；再灌注7d有80％左右锥体细胞受损。西洛他唑治疗组再灌注24、72h和7d，海马CA1区锥体细胞受损程度均较缺血再灌注组减轻，统计学处理24h亚组有显著性差异（P＜0.05），其余两个亚组统计学处理有非常显著性差异（P＜0.01）。2．大鼠学习记忆功能的变化：与假手术对照组比较，5天之中，缺血再灌注组和治疗组平均逃避潜伏期明显延长（P＜0.01）；与缺血模型对照组比较，前4天治疗组平均逃避潜伏期明显缩短（P＜0.01），第5天两组大鼠的平均逃避潜伏期无显著性差异（P＞0.05）。与假手术组相比，缺血再灌注组和治疗组大鼠的平均穿台次数明显减少（分别为P＜0.01，P＜0.05）；与缺血模型对照组相比，治疗组大鼠的平均穿台次数明显增多（P＜0.01）。3．p-Akt的平均光密度值：缺血再灌注组0、1、12h各时间点p-Akt水平均显著低于假手术组（分别为P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01）；治疗组0、1h亚组p-Akt水平显著高于缺血再灌注组0、1h亚组（分别为P＜0.01，P＜0.05）。4．caspase-3平均阳性细胞计数：缺血再灌注组caspase-3平均阳性细胞数均显著高于假手术组（P＜0.01）；治疗组caspase-3平均阳性细胞数显著低于缺血再灌注组（P＜0.05）。结论：1．西洛他唑可以减少大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元的缺失和该区神经元内caspase-3的表达。2．西洛他唑可以改善全脑缺血大鼠的学习记忆能力，这与西洛他唑可以减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元的凋亡有关。3．大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元内有p-Akt表达的急剧降低，而西洛他唑可以抑制该区神经元内p-Akt表达的急剧降低，此可能是西洛他唑对全脑缺血大鼠海马CA1区神经元具有保护作用的机制之一。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第一部分 脑缺血再灌注损伤与迟发性神经元死亡
• 第二部分 西洛他唑与迟发性神经元死亡
• 第三部分 西洛他唑对全脑缺血大鼠学习和记忆功能的影响
• 第四部分 本研究的创新点及不足之处
• 结论
• 附录
• 附录一 全脑缺血模型制作及给药过程相关图片
• 附录二 鼠脑海马CA1区组织病理相关图片及图表
• 附录三 Morris水迷宫结果相关表格
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录
• 学位论文评阅及答辩情况表