新的STK11互作蛋白LOH12CR1的筛选及鉴定

论文摘要

目的:PJS综合征（Peutz-Jeghers syndrome,PJS）是一种常染色体显性遗传疾病,发病率为1/10000-12000。临床表现主要为多发性错构瘤样胃肠息肉以及皮肤粘膜色素沉着,其致病基因STK11位于人类常染色体19p13-3,跨度为23kb,包含10个外显子,由433个氨基酸残基组成,具有调控细胞周期、调节细胞极性以及细胞基础能量代谢等重要功能。虽然大多数PJS患者的致病原因是由于STK11催化活性域的突变导致的激酶功能丧失,但是在部分PJS患者和散发肿瘤中,却存在STK11羧基端的突变,STK11羧基端共123个氨基酸残基,包括多个翻译后修饰位点,对STK11生物学功能的实现起着调节作用,机制尚未明确。方法:本研究利用GST（Glutathione S transferase）融合蛋白表达系统,构建了pGEX4T-2-STK11羧基端重组载体,在低温的条件下诱导了GST-STK11羧基端融合蛋白的表达,并利用Glutathione Sepharose获得高度可溶性GST-STK11羧基端融合蛋白,采用GST-pull down结合质谱分析的方法,筛选到STK11羧基端的可能互作蛋白LOH12CR1。LOH12CR1定位于人12号染色体上,为抑瘤基因的候选基因,且进化上的高度保守。结果:我们通过免疫共沉淀技术证实STK11激酶与LOH12CR1的互作关系;并利用哺乳动物双杂交系统显示两者之间非直接互作,需第三方参与。免疫荧光共定位实验发现STK11与LOH12CR1共定位。结论:STK11与LOH12CR1互作的发现为研究STK11的功能提供新的切入点。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词
• 第一章 前言
• 第二章 STK11互作蛋白的筛选与鉴定
• 第一节 STK11羧基端互作蛋白的筛选
• 1 材料与试剂
• 2 方法
• 3 结果
• 第二节 STK11与LOH12CR1蛋白互作关系验证
• 1 材料与试剂
• 2 方法
• 3 结果
• 第三章 讨论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果