南方中国荷斯坦牛耐热性研究

南方中国荷斯坦牛耐热性研究

论文摘要

本文分别用数量遗传学、分子遗传学、生化遗传学、生物信息学研究奶牛的耐热性能。具体工作及结论如下:(1)南方中国荷斯坦牛耐热性相关参数的研究本研究采用公畜内半同胞相关法,分别从产奶量(350头)、耐热产奶量(116头)、直肠温度(200头)和红细胞钾(144头)四个方面估算奶牛群体遗传力,结果分别是0.334、0.196、0.20、0.318。运用BLUP法估算以色列公牛育种值最高,为85.12。对数据进行回归分析得到方程:y=-0.23853-0.0096x1+0.000827x2(x1为直肠温度,x2为红细胞钾含量)。在两个变量中,只有红细胞钾含量显著的通过了t检验(P<0.05)。(2)南方中国荷斯坦牛耐热性RAPD标记研究及生物信息学分析以52头高产耐热组和41头高产不耐热组中国荷斯坦牛的DNA为材料,选用200条RAPD引物,利用PCR-RAPD技术,对荷斯坦牛的耐热性进行研究。结果发现,使用S441引物和S463引物在高产耐热组中分别发现了581bp和800bp特异性的片段(与奶牛耐热性有关的RAPD的标记),回收、克隆、并测定了581bp、680bp片段的序列。序列比较显示,581bp的片段与KCNN2基因的同源性达90%,其可能是KCNN2基因的内含子3;680bp片段与NW001024067.1同源性达99%,NW001024067.1的功能未知。根据已知KCNN2基因的功能,初步判断KCNN2基因为耐热性能的候选基因。把581bp(RAPD-S441标记)和680bp(RAPD-S463标记)片段提交到Genbank,得到登陆号EF123743和EF123744。利用NCBI的ORF finder在581bp片段中没有发现ORF,这与上一步预测结论相符合。在680bp片段中发现4个ORF,分别为ORF1、ORF2、ORF3、ORF4。这4个阅读框分别编码48AA、34AA、45AA、34AA。并成功将RAPD-S441标记成功转化为SCAR标记。(3)南方中国荷斯坦牛耐热性SCAR标记研究根据RAPD-S441、RAPD-S463标记的测序结果,利用Premier5.0软件设计对应的SCAR引物。本研究成功将RAPD-S441标记耐热SCAR标记。其能很好的区分高产耐热组和高产不耐热组。而RAPD-S463,没有转换成SCAR标记。(4)南方中国荷斯坦牛SSR标记研究本论文在牛6号染色体上,均匀选择了9个微卫星标记(ILSTS093、DIK2029、MNB66、BL1099、BMS360、DIK5389、DIK1182、BM9257、BM143),标记间隔(大约15-20cM)。在实验中,没有发现以上标记与奶牛耐热性能有关。限于篇幅原因,不做具体描述。

论文目录

  • 摘要
  • Abstracts
  • 引言
  • 1 文献综述
  • 1.1 奶牛热应激的机理
  • 1.2 热应激对奶牛的危害
  • 1.2.1 热应激对奶牛生产性能的影响
  • 1.2.2 热应激对奶牛采食量的影响
  • 1.2.3 热应激对奶牛繁殖性能的影响
  • 1.3 奶牛耐热性研究进展
  • 1.3.1 生理和生化指标
  • 1.3.2 红细胞钾
  • 2 研究的目的、背景和意义
  • 3 研究的目标及主要内容
  • 第一章 南方中国荷斯坦牛耐热性相关参数的研究
  • 1 材料与方法
  • 1.1 实验材料
  • 1.2 实验方法
  • 1.2.1 选择实验牛
  • 1.2.2 血样的采集和处理
  • 1.2.3 实验数据
  • 1.3 数据处理
  • 2 结果与分析
  • 2.1 红细胞钾的遗传特性
  • 2.2 直肠温度的遗传力
  • 2.3 生理、生化指标与产奶量下降率对应关系
  • 2.4 估算产奶量遗传力和耐热产奶量
  • 2.5 估算公牛种用价值
  • 3 讨论
  • 3.1 红细胞钾
  • 3.2 直肠温度
  • 3.3 导入外血培育高产耐热品种
  • 3.4 耐热模型
  • 4 小结
  • 第二章 荷斯坦牛耐热性RAPD标记的研究及生物信息学分析
  • 1 材料与方法
  • 1.1 实验材料
  • 1.1.1 牛群及分组
  • 1.1.2 主要仪器设备
  • 1.1.3 主要试剂
  • 1.1.4 溶液配置
  • 1.2 实验方法
  • 1.2.1 模板DNA的制备
  • 1.2.2 PCR-RAPD反应程序
  • 1.2.3 最佳PCR扩增体系
  • 1.2.4 PCR产物检测
  • 1.2.5 RAPD标记的克隆测序
  • 1.2.6 生物信息学分析
  • 2 结果与分析
  • 2.1 奶牛基因组DNA提取结果
  • 2.2 PCR-RAPD扩增电泳结果
  • 2.3 RAPD标记的确定
  • 2.4 酶切鉴定
  • 2.5 生物信息学分析
  • 2.5.1 同源性分析
  • 2.5.2 ORF分析
  • 3 讨论
  • 3.1 PCR-RAPD扩增体系的优化
  • 3.2 RAPD标记的克隆测序
  • 3.3 候选耐热基因KCNN基因家族
  • 4 小结
  • 第三章 荷斯坦牛耐热性SCAR标记的研究
  • 1 材料与方法
  • 1.1 实验材料
  • 1.2 实验方法
  • 1.2.1 SCAR引物设计
  • 1.2.2 PCR-SCAR反应程序
  • 1.2.3 最佳PCR扩增体系
  • 2 结果与分析
  • 3 讨论
  • 3.1 SCAR标记的转化
  • 3.2 耐热性分子标记
  • 4 小结
  • 后记
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢
  • 作者简介
  • 相关论文文献

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