环磷酰胺致大鼠神经管畸形分子机制的研究

论文摘要

目的:在已建立环磷酰胺致大鼠神经管畸形模型的基础上,研究环磷酰胺对胎鼠神经上皮细胞增殖、凋亡、粘着、迁移和分化的影响,进一步探讨其致畸作用的分子机制,为预防人类NTDs的发生提供理论依据。方法:将孕鼠随机分实验组和对照组,实验组在妊娠第13天上午8～9时腹腔注射环磷酰胺（15mg/kg体重）,对照组注射等量生理盐水。分别于给药后4、8、12、24、48小时处死孕鼠,剖腹取出胎鼠,于10%中性福尔马林中固定,常规石蜡包埋、连续切片。应用免疫组织化学和免疫荧光技术检测PCNA、Caspase-3、NCAM、β-tubulin和NeuN在NTDs发生中的表达变化。结果:1、PCNA免疫组织化学结果:给药后4、8小时,实验组神经上皮细胞增殖指数与对照组相比,差异无统计学意义;给药后12小时,实验组神经上皮细胞增殖指数降低,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）;给药后24小时,PCNA阳性细胞主要分布在神经管背侧及背外侧,实验组神经上皮细胞增殖指数降低,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）;给药后48小时,实验组PCNA阳性细胞集中分布在中央管周围及顶板,背外侧细胞少,与对照组相比,神经上皮细胞增殖指数降低,差异有统计学意义（P＜0.01）。2、Caspase-3免疫组织化学结果:给药后4、8小时,实验组神经上皮细胞凋亡指数与对照组相比,差异无统计学意义;给药后12小时,实验组Caspase-3阳性细胞增多,神经上皮细胞凋亡指数与对照组相比增高,差异有统计学意义（P＜0.01）;给药后24小时,实验组Caspase-3阳性细胞明显增多,主要分布在神经管背侧中部及背外侧,与对照组相比,神经上皮细胞凋亡指数增高,差异有统计学意义（P＜0.01）;给药后48小时,实验组Caspase-3阳性细胞数目与给药后24小时相比明显减少,但神经上皮细胞凋亡指数仍高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）。3、NCAM免疫荧光染色结果:给药后4、8小时,实验组NCAM阳性率与对照组相比,差异无统计学意义;给药后12、24、48小时,实验组NCAM阳性细胞数目增多,NCAM阳性率与对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）。4、β-tubulin和NeuN免疫组织化学结果:给药后4、8小时,实验组β-tubulin阳性率与对照组相比,差异无统计学意义;给药后12小时,实验组β-tubulin阳性细胞较对照组减少,差异有统计学意义（P＜0.05）;给药后24、48小时,β-tubulin阳性细胞与对照组相比减少,差异均有统计学意义（P＜0.01）。给药后4、8、12小时,实验组和对照组均未检测到NeuN阳性细胞;给药后24、48小时,实验组与对照组相比,NeuN阳性细胞减少,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论:环磷酰胺可使Caspase-3、NCAM的表达增加,PCNA、β-tubulin、NeuN的表达降低,抑制神经上皮细胞增殖、诱导细胞凋亡、增加细胞间粘着,从而干扰细胞迁移以及神经上皮细胞向神经元方向分化,是CP导致神经管畸形的重要途径之一。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、符号说明
• 四、正文
• （一） 前言
• （二） 材料和方法
• （三） 结果
• （四） 讨论
• （五） 结论
• 五、图表
• 六、参考文献
• 七、致谢
• 八、攻读学位期间已发表及拟发表的学术论文