普通变形杆菌噬菌体的分离鉴定和生物学特性的研究

论文摘要

变形杆菌在自然界中分布较广泛是人体肠道的正常菌群。只有离开了正常寄居的肠道而进入人体其他部位时才引起感染。在医院内,长期接受广谱抗生素、激素、免疫抑制剂、抗肿瘤药等治疗的机体抵抗力下降的病人易感染,先进的检查治疗方法在某种程度上也为变形杆菌入侵人体提供了途径,使变形杆菌在医院内感染中占有重要地位。噬菌体治疗已表现出许多突出的优越性,尤其是针对使用抗生素治疗动物细菌感染时易产生细菌耐药性及残留等缺点。经过大量的动物模型试验及人类临床治疗的实践,对于噬菌体治疗中存在的缺点和不足,人们已经开始在噬菌体的选择、宿主谱、作用效力及其作用的动力学原理等方面进行探索性的改造,从而获得较理想的治疗效果,维护人类及动物的健康。实验中我们采用双层琼脂噬斑法分离、提纯变形杆菌噬菌体,根据《分子克隆指南手册》第二版λ噬菌体核酸提取方法提取核酸并进行酶切。测定该噬菌体的最佳感染复数,绘制一步生长曲线。分析实验结果得出如下结论:本实验利用10株临床分离的变形杆菌为宿主菌,从居民污水中分离得到4株毒性噬菌体,分别命名为噬菌体Pr-v 01、噬菌体Pr-v 02、噬菌体Pr-v 03、噬菌体Pr-v 04,其形成噬斑为圆形、透明、边界清晰。其中噬菌体Pr-v 04滴度最高为2.06×1012PFU/ml,形成直径0.8～2.3mm的溶菌空斑。交叉实验显示噬菌体Pr-v 04裂解能力强、滴度高、较宽的裂解谱,故筛选为本实验的研究对象。电镜显示,噬菌体Pr-v 04蝌蚪形,头部呈多面体立体对称,直径约为40～50nm,有一短尾。基因组DNA经EcoRⅠ、HindⅢ和NedⅠ酶切后、证实为双链DNA,其基因组大小约为26kb,且有多个EcoRⅠ的酶切位点。噬菌体Pr-v 04感染宿主的一步生长曲线显示潜伏期为15min作用,爆发时间为18min左右,裂解量170左右。噬菌体Pr-v 04感染其宿主普通变形杆菌的最佳感染复数为0.1。在4℃条件下,噬斑可保存10个月左右,而噬菌体Pr-v 04与其宿主菌的混悬液可保存至少6个月。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第1章 文献综述
• 1.1 噬菌体的分类
• 1.2 噬菌体的生物学特征
• 1.3 噬菌体的增殖
• 1.4 噬菌体的溶菌过程
• 1.4.1 吸附识别
• 1.4.2 噬菌体溶菌机制的研究
• 1.5 噬菌体治疗的研究进展
• 1.5.1 噬菌体治疗的研究背景
• 1.5.2 治疗性噬菌体的选择
• 1.5.3 噬菌体治疗的优缺点
• 1.5.4 噬菌体治疗的应用与评估
• 1.6 展望
• 第2章 实验正文
• 2.1 材料与试剂
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 宿主菌
• 2.2 方法
• 2.2.1 宿主菌的准备
• 2.2.2 标本的采集及处理
• 2.2.3 噬菌体的分离
• 2.2.4 噬菌体纯化及滴度的测定
• 2.2.5 噬菌体的浓缩
• 2.2.6 噬菌体与宿主菌的交叉培养试验
• 2.2.7 噬菌体核酸的提取
• 2.2.8 噬菌体电镜观察
• 2.2.9 噬菌体核酸酶切电泳
• 2.2.10 噬菌体的感染复数（multiplicity of infection,MOI）的测定
• 2.2.11 噬菌体生长曲线的绘制
• 2.2.12 特异性与裂解谱试验
• 2.2.13 噬菌体的保存
• 2.3 结果
• 2.3.1 噬斑及噬菌体滴度的测定
• 2.3.2 噬菌体的浓缩
• 2.3.3 噬菌体与各宿主菌交叉培养试验
• 2.3.4 噬菌体电镜观察结果
• 2.3.5 变形杆菌核酸提取及酶切电泳
• 2.3.6 噬菌体Pr-v04 的最佳感染复数
• 2.3.7 噬菌体Pr-v04 的一步生长曲线绘制
• 2.3.8 噬菌体的宿主范围
• 2.3.9 噬菌体的保存
• 第3章 讨论
• 第4章 结论
• 参考文献
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果
• 致谢