槐角异黄酮的提取、纯化及水解工艺的研究

论文摘要

本试验以中药槐角为原料,分别采用微波辅助法、超声辅助法及亚临界水法三种方法提取槐角异黄酮,并对三种提取方法进行了比较。然后运用柱层析法对槐角异黄酮提取液进行纯化。选用HPD-300大孔树脂作为柱层析的吸附剂。再用盐酸溶液将初步纯化的槐角异黄酮在一定条件下水解,使其水解为染料木黄酮。最后用HPD-300大孔树脂纯化水解后的槐角异黄酮,得到纯度为90.43%的染料木黄酮。采用微波辅助法提取槐角中的异黄酮,通过单因素及五因素四水平正交试验确定工艺条件为乙醇浓度为60%、微波时间为7 min、微波功率为500 w、提取温度为60℃、液固比为12.5 mL/g,所得槐角异黄酮的得率为77.0 mg/g。采用超声辅助法提取槐角中的异黄酮,通过单因素及五因素四水平正交试验确定的工艺条件为乙醇浓度为80%、超声时间为40 min、超声功率为200 w、超声温度为60℃、液固比为20 mL/g,所得槐角异黄酮的得率为156.3 mg/g。采用亚临界水法提取槐角中的异黄酮,通过单因素及三因素三水平正交试验确定工艺条件为提取温度为130℃、液固比为12.5 mL/g、提取时间45 min,所得的槐角异黄酮的得率为232.8 mg/g。比较了微波辅助法、超声辅助法及亚临界水法三种提取槐角异黄酮的方法。结果显示:亚临界水法提取槐角异黄酮的得率明显高于超声辅助提取及微波辅助提取。采用柱层析法纯化槐角异黄酮,试验确定的工艺条件为选用HPD-300大孔树脂,在25℃条件下,以1 mL/min的流速使浓度为1.5 mg/mL的槐角异黄酮溶液上柱吸附8 h。当上样量为1BV时,采用3BV的85%的乙醇溶液在65℃的条件下以1 mL/min的流速进行洗脱,此时槐角异黄酮的洗脱率为82.6%。经HPD-300大孔树脂纯化后槐角异黄酮的纯度由原来的36.78%提高到76.84%。采用盐酸溶液水解初步纯化的槐角异黄酮,通过单因素及正交试验确定水解的工艺条件为盐酸浓度为1.5 mol/L、水解时间为3 h、水解温度为60℃,运用高效液相色谱法测得在此最优条件下槐角异黄酮的水解率达到98.93%。将水解后得到的染料木黄酮粗产品用HPD-300大孔树脂进行二次纯化,并将纯化后的样品用无水乙醚萃取两次,再用无水乙醇重结晶,然后运用高效液相色谱法测定其浓度,得到纯度为90.43%的染料木黄酮。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 立题背景
• 1.2 染料木黄酮的生理功能
• 1.2.1 植物雌激素功能
• 1.2.2 预防骨质疏松症
• 1.2.3 抗癌作用
• 1.2.4 预防和治疗皮肤疾病
• 1.2.5 预防心血管疾病
• 1.2.6 预防早老年痴呆症
• 1.2.7 其他生理功能
• 1.3 槐角简介
• 1.3.1 槐角概况
• 1.3.2 槐角化学成分
• 1.4 槐角异黄酮的研究概况
• 1.4.1 国内外研究概况
• 1.4.2 异黄酮的检测方法
• 1.5 异黄酮的提取方法介绍
• 1.5.1 有机溶剂浸提法
• 1.5.2 水解法提取
• 1.5.3 亚临界水提取法
• 1.5.4 微波辅助提取法
• 1.5.5 超声辅助提取法
• 1.5.6 超临界流体萃取
• 1.6 柱层析技术简介
• 1.7 异黄酮的水解工艺
• 1.7.1 酸法水解异黄酮
• 1.7.2 碱法水解异黄酮
• 1.7.3 酶法水解异黄酮
• 1.8 本课题研究的主要内容
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验原料
• 2.1.2 试验试剂
• 2.1.3 试验仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 试验路线
• 2.2.2 原料预处理方法
• 2.2.3 染料木黄酮标准曲线的制作
• 2.2.4 槐角中总异黄酮的测定方法
• 2.2.5 微波辅助提取槐角中异黄酮的研究
• 2.2.6 超声辅助提取槐角中异黄酮的研究
• 2.2.7 亚临界水法提取槐角中异黄酮的研究
• 2.2.8 大孔树脂纯化槐角异黄酮的研究
• 2.2.9 槐角异黄酮的水解
• 2.2.10 HPD300 大孔树脂纯化槐角酸水解液的研究
• 3 结果与分析
• 3.1 紫外分光光度法测定异黄酮的含量
• 3.1.1 染料木黄酮标准曲线的制作
• 3.1.2 槐角中总异黄酮含量测定的研究
• 3.2 微波辅助提取槐角中异黄酮工艺的研究
• 3.2.1 乙醇浓度对槐角总异黄酮提取效果的影响
• 3.2.2 微波时间对槐角总异黄酮提取效果的影响
• 3.2.3 微波功率对槐角总异黄酮提取效果的影响
• 3.2.4 提取温度对槐角总异黄酮提取效果的影响
• 3.2.5 液固比对槐角总异黄酮提取效果的影响
• 3.3 微波辅助法提取槐角总异黄酮的正交试验
• 3.4 超声辅助提取槐角中异黄酮工艺的研究
• 3.4.1 乙醇浓度对槐角总异黄酮提取效果的影响
• 3.4.2 液固比对槐角异黄酮提取效果的影响
• 3.4.3 超声时间对槐角异黄酮提取效果的影响
• 3.4.4 超声温度对槐角异黄酮提取效果的影响
• 3.4.5 超声功率对槐角异黄酮提取效果的影响
• 3.5 超声辅助法提取槐角总异黄酮的正交试验
• 3.6 亚临界水提取槐角中异黄酮工艺的研究
• 3.6.1 提取时间对槐角总异黄酮提取效果的影响
• 3.6.2 提取温度对槐角总异黄酮提取效果的影响
• 3.6.3 液固比对槐角总异黄酮提取效果的影响
• 3.7 亚临界水提取槐角总异黄酮的正交试验
• 3.8 三种提取方法的比较
• 3.9 大孔树脂法纯化槐角异黄酮工艺的研究
• 3.9.1 五种型号大孔树脂的静态吸附与解吸性能
• 3.9.2 HPD-300 大孔树脂的静态吸附动力学曲线
• 3.9.3 HPD-300 大孔树脂的静态解吸动力学曲线
• 3.9.4 洗脱剂浓度的确定
• 3.9.5 吸附工艺条件的确定
• 3.9.6 洗脱工艺条件的确定
• 3.10 盐酸水解糖苷型槐角异黄酮的研究
• 3.10.1 液相色谱法测定染料木黄酮的标准曲线
• 3.10.2 酸水解槐角异黄酮的单因素试验
• 3.11 酸水解正交试验
• 3.12 水解纯化后纯度的测定
• 3.12.1 染料木黄酮标准品液相色谱图
• 3.12.2 水解前粗提液液相色谱图
• 3.12.3 酸水解后样品液相色谱图
• 3.12.4 二次纯化后液相色谱图
• 4 结论
• 4.1 创新点
• 4.2 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文