论文题目: 抗磺胺药抗体的制备与免疫分析法的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 生理学
作者: 沈红
导师: 崔胜
关键词: 磺胺甲恶唑,磺胺地索辛,氨苯磺胺,抗体,免疫分析,聚异丙基丙烯酰胺,酶联免疫吸附试验
文献来源: 中国农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 磺胺类药物是一类重要的具有广谱抗菌作用的药物,主要用于预防和治疗细菌感染性疾病,也常做为饲料添加剂促进动物生长,但不合理的使用造成在动物性食品中残留,可能对人类的健康造成潜在危害。为了建立快速灵敏的检测磺胺药残留免疫分析方法,本研究制备了三种磺胺药（SDM、SN、SMX）抗体,并对其特性和应用进行研究,主要研究内容和结果包括以下几方面: 1.采用杂交瘤技术制备了针对磺胺甲恶唑（SMX）的单克隆抗体。通过鉴定单抗为IgG1亚型,效价为1:105,抗体亲和常数为2.3×108L/mol,分子量为162000dalton,抗体对三种有机溶剂甲醇、乙腈和丙酮均有很好的耐受性,与其他磺胺药无交叉反应,结果表明抗体是特异性的。ELISA测定游离磺胺甲恶唑,建立的标准曲线在10pg/ml～10ng/ml之间呈良好的线性关系,线性回归方程为Y=8.91+19.67857X,50%抑制率时检测限为0.82ng/ml,添加回收率在90%以上。 2.合成磺胺甲嗯唑全抗原,免疫动物制备了多克隆抗体,ELISA测定表明抗体具有特异性。采用酶标记抗体或抗原方法,对抗原直接、抗体抑制和双抗夹心三种ELISA方法筛选,选择了双抗夹心法为试剂盒的检测方法,进一步优化试剂盒的各项条件,组装的试剂盒检测样品效果较好,其检测范围为1ng/ml～100μg/ml,灵敏度为20.91ng/ml,板内和板间变异系数分别为2.51%和4.97%,方法的线性关系良好。实际样品测试结果表明试剂盒可用于动物性食品中磺胺药残留的检测。 3.合成磺胺地索辛（SDM）全抗原,免疫动物制备了多克隆抗体,ELISA测定表明抗体具有特异性。多抗与温敏水凝胶聚合为pNIPA-Ab,荧光标记抗原,通过游离SDM与荧光标记的抗原竞争有限量的pNIPA-Ab,建立控温相分离免疫分析SDM的方法,测定SDM的线性范围为1ng/ml～100μg/ml,50%抑制率时检测限是0.64μg/ml,添加回收率在90%以上。结果表明控温相分离免疫分析SDM,可满足对样品的测定。 4.合成氨苯磺胺（SN）全抗原,免疫动物制备了多克隆抗体,ELISA测定表明抗体具有特异性。多抗与温敏水凝胶聚合为pNIPA-Ab,荧光标记抗原,游离SN与荧光标记的抗原竞争有限量的pNIPA-Ab,建立控温相分离免疫分析测定SN的方法,测定SN的线性范围为1ng/ml～100μg/ml,50%抑制率时检测限为60.45ng/ml。结果表明控温相分离免疫分析SN,可满足对样品的检测。
论文目录:
中文摘要
Abstract
第一篇 文献综述
第一章 兽药残留与危害
第二章 磺胺类药物残留与分析
第三章 NIPA系温度敏感水凝胶及分析应用
第二篇 实验研究
第一章 磺胺甲噁唑(SMX)单克隆抗体的制备与表征
第一节 引言
第二节 磺胺甲噁唑全抗原的合成
第三节 磺胺甲噁唑单克隆抗体的制备与表征
第四节 本章小结
第二章 SMX酶联免疫检测试剂盒的研制
第一节 引言
第二节 SMX酶联免疫试剂盒方法的筛选
第三节 试剂盒的组装及评价
第三章 磺胺地索辛(SDM)多克隆抗体的制备与控温相分离免疫分析法的研究
第一节 引言
第二节 磺胺地索辛全抗原的合成与多克隆抗体的制备
第三节 控温相分离免疫分析法测定SDM
第四节 本章小结
第四章 氨苯磺胺(SN)多克隆抗体的制备与控温相分离免疫分析法的研究
第一节 引言
第二节 氨苯磺胺全抗原的合成与多克隆抗体的制备
第三节 控温相分离免疫分析法测定SN
第四节 本章小结
第五章 总结
缩写词
致谢
作者简历
发布时间: 2005-07-18
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