GLP-1对HepG2细胞糖异生关键酶G6Pase的影响及作用机制研究

2020-12-15阅读(918)

论文摘要

目的：1.体外培养人肝肿瘤细胞HepG2细胞系,通过倒置显微镜观察细胞形态变化。2.研究胰高血糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1, GLP-1）对HepG2细胞糖异生的作用及机制-PI3K通路。3.为GLP-1有效的降糖和改善肝胰岛素抵抗等临床治疗提供初步的理论依据。方法：1.体外培养人肝肿瘤细胞-HepG2细胞,通过倒置显微镜形态学观察。2.将培养的HepG2细胞随机分为4组：Control组,GLP-1 （10nmol/L）组,Insulin （10nmol/L）组,Exenatide （10nmol/L）组,除Control组外,其它三组分别干预4、8、24小时。Western blot方法测糖异生关键酶葡萄糖-6-磷酸酶（glucose-6-phosphatase, G6Pase）的蛋白表达,选出合适的干预时间。3.将培养的HepG2细胞随机分为9组：①Control组,②Insulin（10nmol/L）组,③GLP-1（10nmol/L）组,④Exenatide（10nmol/L）组,⑤LY294002（15μmol/L）组,⑥GLP-1 （10nmol/L）+Insulin（10nmol/L）组,⑦Exenatide（10nmol/L）+Insulin（10nmol/L）组,⑧GLP-1（10nmol/L）+LY294002（15μmol/L）组,⑨xenatide （10nmol/L）+LY 294002 （15μmol/L）组。干预一定时间后（时间待定）,用蛋白质印迹（western blot）法测定各组G6Pase的蛋白表达。4.将培养的HepG2细胞随机分为3组：①Control组（5.6mmol/L葡萄糖）,②10mmol/L葡萄糖组,③20mmol/L葡萄糖组。干预一定时间后（时间待定）,western blot法测定各组G6Pase的蛋白表达。观察葡萄糖对G6Pase的影响。结果：1.HepG2肝细胞传代培养情况良好。2.western blot结果表明：与Control组比,GLP-1组、Insulin组、Exenatide组G6Pase的蛋白表达量较低,干预8小时后降低最明显,所以下一步实验干预时间选择8小时。3.（1）与Control组比,Insulin、GLP-1、Exenatide均能降低HepG2肝细胞G6Pase的蛋白表达量（P<0.05）,表明Insuln、GLP-1、Exenatide都能抑制肝糖异生。（2）与Insulin组比,GLP-1-Insulin组和Exenatide+Insulin组G6Pase的蛋白表达量少（P<0.05）。说明GLP-1、Exenatide对G6Pase的抑制与Insulin有叠加作用,GLP-1、Exenatide调节肝糖异生代谢的通路可能与胰岛素不完全一致。（3）与GLP-1组比,GLP-1+LY294002组G6Pase的蛋白表达量增加（P<0.05）；与Exenatide组比,Exenatide+LY294002组G6Pase的蛋白表达量增加（p<0.05）,说明PI3K通路介导了GLP-1、Exenatide对肝糖异生的调节。4.与5.6mmol/L葡萄糖组比,10mmol/L葡萄糖组G6Pase的蛋白表达量无明显变化,20mmol/L葡萄糖组G6Pase的蛋白表达量明显增加（P<0.05）。说明高糖可以促进肝细胞的糖异生或糖原分解作用。结论：本研究通过体外试验验证了GLP-1、Exenatide可直接作用于人肝细胞,调节肝糖异生代谢。试验结果也证实了GLP-1、Exenatide通过减少肝细胞G6Pase的合成,抑制非糖物质转化为糖,减少糖异生。在GLP-1、Exenatide干预的同时给予PI3K阻断剂LY294002后,人肝细胞G6Pase的表达量下降,肝糖异生作用受抑制。由此可知,GLP-1、Exenatide抑制人肝细胞糖异生的作用可能部分通过激活PI3K通路,增加FoxO1 （forkheadbox,Fox）因子（FoxO1因子可以抑制G6Pase基因表达）的表达从而下调G6Pase的基因表达,而使G6Pase蛋白合成减少。高浓度葡萄糖增加G6Pase蛋白表达,使糖异生增加。

论文目录

中文摘要

Abstract

符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

1 人肝细胞HepG2细胞系的培养

1.1 对象

1.2 方法

2 Western blot方法测定G6Pase蛋白的表达

2.1 对象

2.2 方法与步骤

3 凝胶图像分析

4 统计学处理

结果

1 人肝细胞HepG2细胞系体外培养

2 人肝细胞HepG2细胞系G6Pase的western blot法检测及图像分析

2.1 western blot方法测定G6Pase的表达，选择最佳干预时间

2.1 选定8小时为干预时间，western blot方法测定各组G6Pase的表达

2.3 葡萄糖浓度对G6Pase的影响

讨论

1 GLP-1概述

1.1 GLP-1的合成、分泌与代谢

1.2 GLP-1胰腺内的作用

1.3 GLP-1胰腺外的作用

2 GLP-1与肝糖代谢

3 调节肝糖异生的信号通路

4 葡萄糖浓度对G6Pase的影响

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述

综述参考文献

致谢

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标签：胰高血糖素样肽论文; 人肝细胞论文; 葡萄糖磷酸酶论文; 磷脂酰肌醇激酶论文;

GLP-1对HepG2细胞糖异生关键酶G6Pase的影响及作用机制研究

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