Survivin、Livin在胃癌中的表达及SiRNA干扰Survivin基因诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的研究

论文摘要

目的:探讨胃癌（GC）组织中凋亡抑制因子Survivin、Livin表达及其与bcl-2、Ki-67增殖指数和临床病理因素之间的关系;观察Survivin、Livin在胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901中的表达;观察SiRNA干扰Survivin基因表达对人胃癌细胞株BGC-823细胞的Survivin蛋白表达及细胞凋亡率的影响。方法:本研究分为两个部分。第一部分:采用免疫组化S-P法检测70例胃癌、48例癌旁黏膜组织中Survivin、Livin、Bcl-2、Ki-67的表达,分析Survivin、Livin的表达与临床病理因素、预后、Ki-67增殖指数和bcl-2的关系;采用细胞免疫化学S-P法检测胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901中Survivin、Livin蛋白的表达;第二部分:以脂质体lip-2000为载体,用针对Survivin特异靶点的SiRNA转染入人胃癌细胞株BGC-823细胞后,用免疫细胞化学SP法、Western Blot检测Survivin蛋白表达变化,并采用TUNEL法检测SiRNA转染及SiRNA转染联合5-Fu作用前后细胞凋亡率的变化。结果:第一部分:（1）免疫组化结果显示:Survivin、Livin在胃癌细胞的胞核或（和）胞质高表达,胃癌组织N-Survivin、C-Survivin高表达率均为28.57%;N-Livin、C-Livin高表达率分别为42.86%、40%;Bcl-2在胃癌细胞的胞质表达,阳性率为52.86%;胃癌组织中Survivin、Livin、Bcl-2的阳性表达率均显著高于癌旁胃黏膜（P＜0.01）;（2）C-Survivin表达在高、中、低分化腺癌间差异有显著性（P＜0.05）;C-Survivin表达在乳头状腺癌与差分化腺癌之间的差异有显著性（P＜0.01）;C-Survivin、N-Survivin高表达率均与胃癌远处转移呈正相关（P＜0.05）;N-Survivin高表达与胃癌的浸润生长呈正相关性（P＜0.05）;C-Livin表达在高、中、低分化腺癌问差异有显著性（P＜0.05）;C-Livin表达在差分化腺癌及黏液腺癌与乳头状腺癌之间差异有显著性（P＜0.05）;Bcl-2阳性表达与胃癌的TNM分期呈负相关（P=0.05）;（3）N-Survivin高表达组的5年生存率（40%）明显低于Survivin核阴性和低表达组（66%,P=0.04）;（4）70例GC组织Ki-67指数为34.47±24.58,显著高于癌旁胃黏膜组织（P＜0.01）;N-Surviv in、N-Livin高表达组、弱表达组Ki-67指数均明显高于无表达组,差异均有显著性（P＜0.05）;（5）Survivin、Livin及Bcl-2之间两两分析,发现三者表达之间均无相关性;（6）多因素COX回归分析,仅临床TNM分期对胃癌患者有预后意义（P＜0.05）;（7）免疫细胞化学结果显示:BGC-823和SGC-7901细胞的胞质和胞核均可表达Survivin和Livin蛋白。第二部分:免疫细胞化学及Western Blot结果显示:Survivin-SiRNA转染BGC-823细胞48小时后,Survivin蛋白表达被明显抑制。TUNEL检测结果显示:Survivin蛋白表达抑制促进BGC-823细胞凋亡,SiRNA联合5-Fu可增强BGC-823细胞对凋亡的敏感性。结论:（1）Survivin、Livin和Bcl-2在胃癌组织中均高表达,各自在胃癌发生发展的不同阶段独立地发挥作用;N-Survivin高表达与胃癌细胞的增殖、转移密切相关,可作为判断胃癌恶性程度和预后的标志。（2）Survivin和Livin在胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的胞质和胞核均表达。（3）Survivin-SiRNA可有效沉默人胃癌细胞株BGC-823细胞Survivin基因表达,促进细胞凋亡,联合5-Fu可增强细胞对凋亡的敏感性。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 凋亡抑制因子Survivin和Livin在胃癌中的表达及与bcl-2、Ki-67的关系
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 SiRNA干扰Survivin基因诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的实验研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 附录
• 致谢
• 综述
• 综述参考文献