蜜环菌的化学成分及生物活性研究

论文摘要

蜜环菌[Armillaria mellea （Vahl ex Fr.） Quel]是属于白磨科（Trichol omataceae）蜜环菌属[Armillaria（Fr.）Staude.]的药食兼用菌。蜜环菌子实体具有催眠、镇静、抗眩晕、改善心脑血液循环及较强的脑保护作用,可以治疗多种疾病。蜜环菌是我国滋补保健类中药材之一,倍受国内外学者青睐,其化学成分更是研究的重点。蜜环菌发酵液作为蜜环菌资源的一部分,并未被系统的研究报道过,鉴于此,作者对蜜环菌发酵液中化学成分进行了深入研究,意在明确有效部位的作用,开发符合市场需求的现代中药或保健产品,这也是中药现代化的基本目标之一。研究内容包括以下几个方面：首先,作者采用文献检索的方法对蜜环菌的化学成分与药理作用研究进行了综述,为深入研究蜜环菌发酵液中的化学成分与药理活性提供较为详实的资料。其次,采用乙醚回流提取蜜环菌发酵液中的挥发性成分,并进行GC-MS分析。实验分离鉴定出41个化合物,占挥发性成分色谱峰总面积的95.935%,包括糠醛类（主要）、酮类、酯类及香豆素类等。通过实验可以初步了解发酵液的物质基础,为研究蜜环菌发酵液中的其它化学成分提供参考。第三,成分分析。本文把蜜环菌发酵液水提物分成石油醚,乙酸乙酯、正丁醇及水四个部位。对乙酸乙酯部位进行硅胶柱色谱、凝胶柱色谱分析,经制备液相分离出4个化合物,鉴定其中2个：5-羟甲基糠醛（5-HMF）及双5-甲酰基糠基醚,这2个已知化合物均为首次从蜜环菌发酵液中分得。第四,对蜜环菌发酵液的提取工艺进行优化。以5-HMF提取率为衡量指标,在单因素实验的基础上确定正交实验因素,并通过实验确定各因素在提取率上影响的大小,确定最佳的提取工艺：提取溶剂量6倍量、提取时间20min、提取次数2次。第五,蜜环菌发酵液中多糖的提取、分离、纯化及结构研究。利用水提醇沉的方法得到蜜环菌发酵液中的粗多糖,采用分级醇沉、凝胶柱色谱法分离得到均一多糖AMFP3-2、 AMFP4-2;以高效液相色谱法为检测手段,测定均一多糖的分子量及纯度,用PMP柱前衍生HPLC法测定单糖组成。结果表明AMFP3-2、AMFP4-2的均一性很好,峰位分子量分别为258929D和1828D,分别由Man、L-Rha、GalUA、Glc、Gal、Xyl、L-Arab; Man、 L-Rha、GlcUA、GalUA、Glc、Gal、L-Arab构成。通过部分酸水解、甲基化、紫外、红外、核磁等相关信息对AMFP3-2的结构做初步解析：AMFP3-2是主要由GalUA、Gal组成,多以（1→6）,（1→3,6）键型连接的均一多糖。最后,蜜环菌发酵液中小分子部分药效学活性的研究。以蜜环菌发酵液乙酸乙酯部分为研究对象,采用化学及热刺激法、阻断大鼠双侧动脉引起完全脑缺血及小鼠断头法,考察小分子成分的镇痛、对脑缺血的保护作用；并通过观察在小鼠乏氧条件下小分子部分的抗乏氧作用。结果表明乙酸乙酯部分可明显减少反映小鼠疼痛时所做出的动作,具有显著的镇痛作用；对阻断双侧颈动脉引起脑缺血大鼠脑组织病理改变有较好的改善作用,并能显著延长常压乏氧情况下小鼠的存活时间。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 研究现状
• 1.3 论文研究的目的意义
• 1.4 论文研究的内容
• 第二章 蜜环菌发酵液中挥发性成分的GC-MS分析
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果与分析
• 2.4 小结
• 第三章 蜜环菌发酵液中化学成分的研究
• 3.1 设备、试剂与材料
• 3.2 化合物的提取分离与纯化
• 3.3 化合物结构鉴定及其波谱数据
• 3.3.1 Ⅱ3-1’结构鉴定
• 3.3.2 Ⅱ5-2’结构鉴定
• 第四章 蜜环菌发酵液提取工艺的优化
• 4.1 材料与仪器
• 4.2 实验条件及样品处理
• 4.2.1 色谱条件
• 4.2.2 对照品溶液的制备
• 4.2.3 供试品溶液的配制
• 4.3 方法学考察及结果分析
• 4.4 正交实验设计方法与结果分析
• 4.4.1 单因素考察与结果分析
• 4.4.2 5-HMF测定波长的确定
• 4.4.3 正交实验结果与分析
• 第五章 蜜环菌发酵液中多糖的研究
• 第一节 蜜环菌发酵液多糖的提取分离及纯化
• 5.1 仪器、试剂与材料
• 5.2 提取分离及纯化
• 5.3 实验方法与结果分析
• 5.3.1 中性糖含量测定-苯酚硫酸法
• 5.3.2 糖醛酸含量测定-间羟基联苯法
• 5.3.3 HPLC分析检测均一多糖
• 5.3.4 组成糖分析
• 第二节 均一多糖AMFP3-2的结构研究
• 5.4 主要仪器、试剂及材料
• 5.5 实验方法及结果分析
• 5.5.1 部分酸水解分析
• 5.5.2 甲基化分析
• 5.5.3 紫外光谱分析
• 5.5.4 红外光谱分析
• 13C NMR谱分析'>5.5.5 AMFP3-2的¹³C NMR谱分析
• 第六章 蜜环菌发酵液提取物药效学活性的研究
• 6.1 实验材料
• 6.2 实验方法及结果
• 6.2.1 含量测定
• 6.2.2 镇痛作用
• 6.2.3 对脑缺血的保护作用
• 6.2.4 常压耐乏氧作用
• 6.3 小结
• 总结与讨论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 作者简介
• 附录