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35种虫草及其无性型鉴定、活性筛选和细脚拟青霉提取物的抗抑郁作用及相关机制

2020-11-22阅读(901)

35种虫草及其无性型鉴定、活性筛选和细脚拟青霉提取物的抗抑郁作用及相关机制

论文摘要

抑郁症是一类病因复杂的精神疾病，已经成为不容忽视的医学和社会问题。目前，从中草药及微生物中寻找抗抑郁药已成为该领域的研究热点之一。虫草Cordyceps(Fr.)Link是一大类重要的昆虫病原真菌，也是受人瞩目的药物资源宝库。前期的研究结果表明，一些虫草类真菌代谢产物具有抑制MAO活性和抗抑郁作用。在此基础上，增加供试的虫草菌株并应用不同测定方法进行活性筛选，同时对供试虫草及其无性型进行鉴定和关系确证，以保证所用菌株的正确性。综合不同模型筛选的结果，优选出细脚拟青霉，再选择不同地理来源的10株细脚拟青霉进行复筛，优化复筛得到的菌株的培养工艺和发酵液提取工艺，按优化工艺培养和提取所得的样品即为BCPT。最后，应用慢性不可预知性应激模型研究BCPT对CUS大鼠抗抑郁作用及其机制，内容包括BCPT对CUS大鼠行为的影响，并从组织、细胞和基因等不同水平上研究BCPT抗实验性抑郁作用与组织过氧化、免疫功能调节和下丘脑CRH mRNA表达等方面的关系，探讨了可能的作用机制。本论文的主要研究结果如下： 1 虫草及其无性型鉴定 采用Kobayasi的分类系统和Dictionary of the Fungi(9th edition)的标准鉴定虫草及其无性型，并通过形态和分子手段及人工培养虫草子实体等方法，确证有性型与无性型两者的对应关系。鉴定虫草15种，无性型20种(供试菌株45株)，其中虫草及其无性型新种3个、新变种1个、新组合2个和中国新记录1个，即：根足被毛孢新种Hirsutella heteropoda、黄山被毛孢新种Hirsutella huangshanensis

论文目录

  • 缩略词表
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 1 前言
  • 2 实验材料
  • 2.1 虫草标本来源及供试菌株
  • 2.2 动物
  • 2.3 药品与试剂
  • 2.4 常用培养基
  • 2.5 仪器与设备
  • 3 实验方法
  • 3.1 供试虫草有性型的鉴定
  • 3.2 供试虫草无性型的分离和鉴定
  • 3.3 供试虫草有性型与无性型的关系确证
  • 3.3.1 经典方法
  • 3.3.2 分子生物学方法
  • 3.4 供试虫草无性型及相关菌株活性筛选
  • 3.4.1 菌种初筛
  • 3.4.1.1 SOD活性和含量比较研究
  • 3.4.1.2 体外清除DPPH自由基活性
  • 3.4.1.3 体外抑制单胺氧化酶活性
  • 3.4.2 细脚拟青霉菌株复筛
  • 3.4.2.1 体外清除DPPH自由基活性筛选
  • 3.4.2.2 体外抑制MAO活性筛选
  • 3.5 细脚拟青霉RCEF0788菌株的形态学再鉴定
  • 3.6 初步确定细脚拟青霉RCEF0788菌株的培养时间
  • 3.7 发酵工艺对抑制单胺氧化酶活性的影响
  • 3.7.1 单因素
  • 3.7.1.1 氮源
  • 3.7.1.2 碳源
  • 3.7.1.3 pH
  • 3.7.2 正交设计
  • 3.7.3 正交设计结果验证和细脚拟青霉优化培养工艺的确立
  • 3.7.4 阿拉伯糖种类和灭菌方式对产物抑制MAO活性的影响
  • 3.8 提取过程中浓缩温度对产物抑制MAO活性的影响
  • 3.9 活性部位的初步研究
  • 3.9.1 不同有机溶剂提取物活性比较
  • 3.9.2 硫酸铵盐析后活性部位分析
  • 3.10 细脚拟青霉优化工艺后发酵液提取物的基本化学成分研究
  • 3.11 BCPT的抗抑郁作用及机理研究
  • 3.11.1 慢性应激（CUS）抑郁大鼠模型
  • 3.11.2 CUS大鼠开野行为的测定
  • 3.11.3 CUS大鼠糖水消耗量测定
  • 3.12 大鼠脑组织脂质过氧化有关指标测定
  • 3.12.1 蛋白质含量的测定
  • 3.12.2 丙二醛（MDA）含量测定
  • 3.12.3 一氧化氮（NO）含量测定
  • 3.12.4 过氧化氢酶（CAT）活性测定
  • 3.12.5 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定
  • 3.12.6 谷光甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力测定
  • 3.13 免疫功能有关指标检测
  • 3.13.1 CUS大鼠血清对正常小鼠脾淋巴细胞转化实验
  • 3.13.2 对CUS大鼠脾淋巴细胞转化实验
  • β、IL-6和TNF-α含量测定'>3.13.3 CUS大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量测定
  • 3.14 CUS大鼠大脑皮质神经元BDNF和Bax的测定
  • 3.14.1 标本制作
  • 3.14.2 计算机图像分析方法
  • 3.15 大鼠血清CORT、血浆ACTH含量及下丘脑CRH mRNA表达的测定
  • 3.15.1 血清CORT和血浆ACTH含量测定
  • 3.15.2 RT-PCR法检测大鼠下丘脑CRH mRNA表达
  • 3.16 大鼠海马超微结构观察
  • 3.17 数据的统计学处理
  • 4 实验结果
  • 4.1 虫草及其无性型鉴定以及两者关系确证
  • 4.1.1 拟细虫草及其无性型拟细羽束梗孢新组合
  • 4.1.2 台湾虫草及其无性型黄山被毛孢新种
  • 4.1.3 柱孢虫草及其无性型紫色野村菌
  • 4.1.4 牯牛降虫草新种及其绿僵菌无性型
  • 4.1.5 根足虫草变种琅琊山新变种及其无性型根足被毛孢新种
  • 4.1.6 蛹虫草及其蚧霉属无性型新组合
  • 4.1.7 其它虫草及其无性型
  • 4.2 虫草无性型及相关菌株的活性筛选
  • 4.2.1 菌种初筛
  • 4.2.1.1 SOD比较研究
  • 4.2.1.2 清除DPPH自由基活性
  • 4.2.1.3 体外抑制MAO活性
  • 4.2.2 细脚拟青霉菌株复筛
  • 4.2.2.1 体外清除DPPH自由基活性筛选
  • 4.2.2.2 体外抑制MAO活性筛选
  • 4.3 细脚拟青霉RCEF0788菌株的形态学再鉴定
  • 4.4 细脚拟青霉RCEF0788菌株的培养时间初步确定
  • 4.5 RCEF0788菌株抑制MAO活性产物的培养和提取工艺
  • 4.5.1 单因素
  • 4.5.2 正交设计
  • 4.5.3 正交设计结果验证和最优培养工艺的确立
  • 4.5.4 阿拉伯糖种类和除菌方式对产物抑制MAO活性的影响
  • 4.5.5 浓缩温度对抑制MAO活性的影响
  • 4.5.6 不同有机溶剂提取物活性比较
  • 4.5.7 BCPT基本成分分析
  • 4.6 BCPT的抗抑郁作用及机理
  • 4.6.1 BCPT对CUS大鼠开野行为的影响
  • 4.6.2 BCPT对CUS大鼠糖水消耗量的影响
  • 4.6.3 BCPT对CUS大鼠脑组织脂质过氧化的影响
  • 4.6.3.1 BCPT对大鼠脑组织中MDA和NO含量的影响
  • 4.6.3.2 BCPT对大鼠脑组织中CAT、SOD及GSH-PX活力的影响
  • 4.6.4 BCPT对CUS大鼠免疫功能的影响
  • 4.6.4.1 CUS大鼠血清对正常小鼠脾淋巴细胞转化的影响
  • 4.6.4.2 BCPT对CUS大鼠脾淋巴细胞转化的影响
  • β、IL-6和TNF-α含量的影响'>4.6.4.3 BCPT对CUS大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量的影响
  • 4.6.5 BCPT对CUS大鼠大脑皮质神经元BDNF的影响
  • 4.6.6 BCPT对CUS大鼠大脑皮质神经元Bax的影响
  • 4.6.7 BCPT对CUS大鼠血清CORT、血浆ACTH含量及下丘脑CRH mRNA表达的影响
  • 4.6.7.1 BCPT对CUS大鼠血清CORT和血浆ACTH含量的影响
  • 4.6.7.2 BCPT对CUS大鼠下丘脑CRH mRNA表达的影响
  • 4.6.8 BCPT对CUS大鼠海马超微结构的影响
  • 5 讨论
  • 6 小结
  • 参考文献
  • 附录
  • 1 作者简介
  • 2 在学期间研究成果
  • 3 致谢
  • 综述1、2及参考文献
  • 图版或图
  • 实验流程图

    • 相关论文文献

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