论文题目: 土贝母化学成分及抗肿瘤活性研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 农产品加工及贮藏工程
作者: 马挺军
导师: 吕飞杰,胡小松
关键词: 土贝母,化学成分,三萜皂苷,抗肿瘤活性,端粒酶
文献来源: 中国农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 土贝母Bolbostemma paniculatum （Maxim.） Franquet为葫芦科假贝母属植物,系攀援性蔓生草本,生于山坡或平地,是一种传统中药。假贝母属有2种、1变种,为我国特有。主产于河南、河北、山西、内蒙古、山东、陕西、甘肃、云南、四川等地。野生分布广,人工种植已获成功,产量颇丰。块茎供药用,干燥块茎质地坚硬,可长期保存。《中华人民共和国药典》2000年版记载土贝母具有散结,消肿,解毒之功效。可用于乳痈,乳腺炎,颈淋巴结结核,慢性淋巴结炎,肥厚性鼻炎等。从中分离出来的土贝母皂苷经实验证明具有抗肿瘤、抗病毒、抗促瘤等药理作用,引起广泛的关注。为了阐明其活性成分,并为开发利用提供科学依据,我们对其进行了较系统的化学成分研究。 利用多种色谱分离手段,从土贝母根茎中分离得到了30个化合物,采用多种光谱技术鉴定了26个化合物,其中: 皂苷8个,分别为:土贝母苷Ⅰ（BB-1）,土贝母苷Ⅵ（BB-2）,土贝母苷Ⅱ（BB-3）,土贝母苷Ⅲ（BB-4）,土贝母苷Ⅳ（BB-5）,7β,18,20,26-四羟基-20（S）-24 E-达玛甾烯-3-O-α-L-（3′-乙酰基）吡喃阿拉伯糖-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（BB-6）,7β,18,20,26-四羟基-20（S）-24 E-达玛甾烯-3-O-α-L-（4′-乙酰基）吡喃阿拉伯糖-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（BB-7）,7β,18,20,26-四羟基-20（S）-24 E-达玛甾烯-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-（1→2）-β-D-（6′-乙酰基）吡喃葡萄糖苷（BB-8）; 杂环化合物4个:麦芽酚（BC-1）,尿囊素（BC-2）,腺甘（BC-3）,胞嘧啶（BC-4）;蒽醌1个:大黄素（BC-5）; 三萜及甾醇5个:葫芦素B（BC-6）,△7,22,25-豆甾三烯-3β-醇（BC-7）,△7,22,25-豆甾三烯醇-3-O-β-D吡喃葡萄糖苷（BC-8）,β-谷甾醇（BC-9）,胡萝卜甘（BC-10）; 糖类及苷类4个:B-D-葡萄糖2→1β-D-葡萄糖苷（BB-9）,麦芽糖（BB-10）,α-羟基丙酮葡萄糖苷（BC-11）,蔗糖（BC-12）; 脂肪酸及烷烃4个:棕榈酸（BP-4）,三十一烷（BP-1）,三十烷（BP-2）,二十九烷（BP-3）。 其中新化合物1个:BB-2;9个化合物BP-1,BP-2,BP-3,BC-2,BC-4,BC-9,BC-10,BC-11,BB-9为首次从本属植物中分离得到。 对土贝母的5个粗提部位和分离得到的部分化合物进行了体外抗肿瘤活性筛选,初步确定了活性部位。体外实验结果表明,土贝母总提取物、氯仿部位和正丁醇部位对HL-60（急性早幼粒白血病）、HeLa（子宫颈癌细胞）、MDA231（乳腺癌）、KB（人鼻咽癌）、WM451（神经胶质瘤）都有很强的增殖抑制效应;石油醚、氯仿部位对KB细胞有细胞毒作用,其中氯仿部位的IC50<10μg/mL。 土贝母苷甲作用SH-SY5Y（人骨髓神经母细胞瘤）24h后细胞阻滞于S期,诱导SH-SY5Y细胞发生中期凋亡。免疫组化的结果显示苷甲作用48h后,hTERT蛋白和C-myc蛋白的表达均下降,土贝母甘甲作用SH-SY5Y细胞24h后,可下调其端粒酶活性。结果表明土贝母苷甲可抑制hTERT和C-myc蛋白的表达,进而下调SH-SY5Y细胞的端粒酶活性。 探讨了大孔吸附树脂法对土贝母总皂甘分离的影响。以土贝母总皂甘的吸附量和解吸率为指
论文目录:
第一章 文献综述与立题思路
1.1 土贝母的化学成分
1.1.1 皂苷类化合物
1.1.2 甾醇类化合物
1.1.3 生物碱类化合物
1.1.4 其它类化合物
1.2 土贝母的药理作用
1.3 毒性作用
1.3.1 细胞毒性
1.3.2 急性毒性
1.3.3 亚急性毒性
1.4 药代动力学及临床研究概况
1.5 资料分析与立题思路
1.5.1 资料分析
1.5.2 研究内容和设计
第二章土贝母化学成分的研究
2.1 材料与方法
2.1.1 试验材料
2.1.2 仪器设备
2.1.3 药品、试剂
2.1.4 土贝母化学成分的提取与分离
2.2 结果与分析
2.2.1 化合物的结构解析
2.2.2 化合物的结构鉴定数据
2.3 讨论
第三章 土贝母的营养成分及挥发油成分分析
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 土贝母主要营养成分
3.2.2 土贝母中可溶性糖含量
3.2.3 土贝母中矿质元素含量
3.2.4 土贝母氨基酸组成及含量
3.2.5 土贝母挥发油成分
3.3 讨论
第四章 大孔吸附树脂纯化富集土贝母总皂苷的研究
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 仪器与试剂
4.1.3 标准曲线考察
4.1.4 样品溶液的制备
4.1.5 样品含量测定方法
4.1.6 静态吸附量考察
4.1.7 大孔吸附树脂洗脱度考察
4.1.8 最大动态吸附量考察
4.2 结果与分析
4.2.1 检测波长的选择
4.2.2 标准曲线的制备
4.2.3 静态吸附量分析
4.2.4 大孔吸附树脂洗脱度考察
4.2.5 树脂洗脱量的考察
4.2.6 最大动态吸附量考察
4.2.7 乙醇浓度对洗脱效果的影响
4.2.8 大孔树脂吸附条件的优化
4.2.9 工艺验证试验
4.3 结论
4.4 讨论
第五章 HPLC法测定土贝母苷甲方法的建立
5.1 材料与方法
5.1.1 土贝母材料
5.1.2 仪器
5.1.3 试剂和药品
5.1.4 对照品溶液的制备
5.1.5 样品溶液的制备
5.1.6 色谱条件
5.2 结果与分析
5.2.1 测定波长的选择
5.2.2 流动相的选择
5.2.3 对照品溶液的浓度—峰面积线性响应范围
5.2.4 精密度试验
5.2.5 稳定性试验
5.2.6 重复性试验
5.2.7 回收率试验
5.2.8 土贝母样品的测定
5.3 讨论
第六章 土贝母的抗肿瘤活性研究
6.1 材料
6.1.1 细胞与药物
6.1.2 试剂
6.1.3仪器
6.2 方法
6.2.1 细胞培养
6.2.2 增殖指标的测定
6.2.3 细胞形态学观察
6.2.5 细胞周期观察
6.2.6 细胞凋亡观察
6.2.7 免疫组化法测定hTERT和C-myc的表达
6.2.8 SDS-PAGE及Western-blotting
6.2.9 端粒酶活性检测
6.3 结果与分析
6.3.1土贝母提取物组分对HL60的生长的抑制效应
6.3.2 土贝母提取物对WM-451的生长的抑制效应
6.3.3土贝母提取物对KB的生长的抑制效应
6.3.4土贝母提取物对MDA231的生长的抑制效应
6.3.5 土贝母提取物对Hela的生长的抑制效应
6.3.6单体化合物对肿瘤细胞生长的影响
6.3.7 土贝母总苷、苷甲对SH-SY5Y细胞的生长抑制作用
6.3.8 形态学观察
6.3.9流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期
6.3.10 SH-SY5Y细胞C-myc利hTERT抗原免疫细胞化学染色
6.3.11 SDS-PAGE及hTERT的Western-blotting
全文总结与展望
1.本文实验研究总结
2.创新点：
3.工作展望：
参考文献
个人简历
附图目录
发布时间: 2005-07-18
参考文献
- [1].土贝母皂苷、苷甲的抗癌作用研究[D]. 宋刚.华南理工大学2005
- [2].土贝母的活性成分研究[D]. 郑春辉.沈阳药科大学2005
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- [5].红药化学成分和生物活性初步研究[D]. 王满元.中国中医研究院2005
- [6].中药猫爪草抗肿瘤有效部位的研究[D]. 王爱武.山东中医药大学2005
- [7].预知子化学成分及其生物活性研究[D]. 蒋丹.东北师范大学2006