三甲氧基二苯乙烯对小鼠巨噬细胞产生TNF-α及NF-κB活性的调控作用研究

论文摘要

目的:研究三甲氧基二苯乙烯（BTM）对小鼠巨噬细胞经脂多糖诱导后产生TNF-α及NF-κB活化的调控作用。方法:RAW246.7小鼠巨噬细胞株培养长满单层后,消化收集细胞,调整细胞浓度为3×105/ml,接种于24孔板中,每孔加入细胞悬液1ml,同时各孔内放入无菌的盖玻片以制作细胞爬片,培养24小时后弃去培养基,各孔加入浓度分别为5、10、20、40、80μmol/L的BTM和白藜芦醇1ml/孔培养30min后,再加入10μg/ml的脂多糖（LPS）1ml/孔培养6小时,然后收集细胞上清液用L929细胞结晶紫染色法检测TNF-α的活性,用细胞毒百分率表示上清液所含TNF-α的活性,抑制百分率表示药物对巨噬细胞产生TNF-α的抑制程度。细胞爬片用免疫细胞化学法检测巨噬细胞中NF-κB的表达,用阳性细胞率表示NF-κB的活化程度。以加白藜芦醇的细胞作为药物对照组,以不加药物仅加LPS的细胞作为阴性对照组（LPS组）,以不加药物亦不加LPS的细胞作为正常对照组。结果:1.①BTM和白藜芦醇本身对L929细胞无细胞毒性;②巨噬细胞经LPS刺激后其上清液的细胞毒百分率为62.27%;③经不同浓度BTM处理后巨噬细胞产生TNF-α的水平呈剂量依赖性减少,其上清液的细胞毒百分率分别为41.72%、32.82%、25.77%、13.50%、4.29%,与LPS组比较差别有统计学意义（P＜0.01）,各处理组之间比较差别有统计学意义（P＜0.05）;④经不同浓度白藜芦醇处理后巨噬细胞产生TNF-α的水平呈剂量依赖性减少,其上清液的细胞毒百分率分别为54.91%、50.00%、45.40%、33.74%、21.78%,与LPS组比较差别有统计学意义（P＜0.01）,各处理组之间比较差别有统计学意义（P＜0.05）;⑤BTM抑制巨噬细胞产生TNF-α的能力大于白藜芦醇,不同浓度下抑制百分率分别为33.00%VS11.82%、47.29%VS19.70%、58.62%VS27.09%、78.32%VS45.81%、93.11%VS65.02%,各组之间比较差别有统计学意义（P＜0.01）。2.①巨噬细胞经LPS刺激后NF-κB被活化,其表达NF-κB的阳性细胞率为98.55±1.36%;②经不同浓度BTM处理后,巨噬细胞表达NF-κB的阳性率呈剂量依赖性减少,分别为63.17±2.22%、53.28±1.60%、40.97±2.11%、27.06±2.22%、7.05±0.92%,与LPS组比较差别有统计学意义（P＜0.01）,各处理组之间比较差别有统计学意义（P＜0.01）;③经不同浓度白藜芦醇处理后,巨噬细胞表达NF-κB的阳性率呈剂量依赖性减少,分别为88.42±4.51%、77.37±2.03%、69.22±3.31%、56.21±1.41%、35.83±2.56%,与LPS组比较差别有统计学意义（P＜0.01）,各处理组之间比较差别有统计学意义（P＜0.01）;④BTM抑制巨噬细胞表达NF-κB的能力大于白藜芦醇,不同浓度下其抑制百分率分别为35.90%VS10.28%、45.94%VS21.94%、58.43%VS29.26%、72.54%VS42.96%、92.85%VS63.64%,各组之间比较差别有统计学意义（P＜0.01）。3.巨噬细胞经BTM和白藜芦醇处理后,其上清液中TNF-α的细胞毒百分率和其表达NF-κB的阳性细胞率均与药物浓度成负相关,而TNF-α的细胞毒百分率和NF-κB的阳性细胞率成正相关,相关性均有统计学意义（P＜0.01）。结论:1.BTM和白藜芦醇在浓度为5-80μmol/L范围内呈浓度依赖性地抑制巨噬细胞经LPS诱导的TNF-α的产生和NF-κB的活化。2.BTM和白藜芦醇可通过抑制NF-κB的活化来抑制TNF-α的产生。3.BTM抑制巨噬细胞产生TNF-α和NF-κB活化的能力大于白藜芦醇。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词
• 前言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计学处理
• 第二章 结果
• 2.1 BTM和白藜芦醇对L929细胞的毒性检测
• 2.2 L929细胞结晶紫染色法检测TNF-α的活性
• 2.3 免疫细胞化学法检测NF-κB的活性
• 2.4 药物浓度、TNF-α活性及NF-κB活性之间的相关性分析
• 第三章 讨论
• 3.1 TNF-α和NF-κB在免疫炎症反应发病机制中的作用
• 3.2 BTM和白藜芦醇对TNF-α和NF-κB的影响
• 3.3 结语
• 第四章 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 在读期间成绩