得力生注射液对人前列腺癌DU-145细胞增殖及凋亡的影响

论文摘要

目的:探讨得力生注射液对人雄激素非依赖性前列腺癌DU-145细胞增殖及凋亡的影响以及诱导DU-145细胞凋亡的机理。方法:采用细胞培养技术,用25μl/ml、50μl/ml、100μl/ml、200μl/ml的得力生注射液处理DU-145细胞48 h。以光镜观察DU-145细胞形态变化,以MTT法检测DU-145细胞生长情况,以流式细胞仪检测DU-145细胞周期及凋亡率的变化,以免疫细胞化学法结合图像分析系统检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Capase-3、TNF-α和caspase-8的表达情况。结果:得力生注射液作用DU-145细胞48小时后,出现了细胞凋亡的形态学改变,表现为体积缩小、染色质凝集、核固缩;DU-145细胞增殖受到抑制,细胞凋亡百分率增高,呈一定的量效关系;细胞周期阻滞于G2/M期;使DU-145细胞Bax蛋白表达增高、Bcl-2蛋白表达降低、Bax/Bcl-2比值上升和Caspase-3蛋白表达增高;使DU-145细胞TNF-α和caspase-8蛋白表达增高。结论:得力生注射液可抑制DU-145细胞增殖,使细胞周期阻滞于G2/M期;能诱导DU-145细胞凋亡,其机制与“线粒体通路”中Bcl-2表达降低、Bax、Bax/Bcl-2比值和Caspase-3表达增高以及“死亡受体通路”中TNF-α和caspase-8表达增高有关。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 实验研究
• 1.实验材料
• 1.1 实验药物
• 1.2 细胞来源
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要实验仪器
• 2.实验方法
• 2.1 培养液及试剂配制
• 2.1.1 RPMI-1640培养液
• 2.1.2 RPMI-1640完全培养液的配制
• 2.1.3 胎牛血清的灭活
• 2.1.4 D-Hank's平衡液
• 2.1.5 0.125%胰蛋白酶
• 2.1.6 PBS缓冲液
• 2.1.7 10%冰醋酸
• 2.1.8 5.6%NaHCO3
• 2.1.9 姬姆萨染液配制
• 2.2 人前列腺癌DU-145细胞的培养
• 2.2.1 人前列腺癌DU-145细胞的培养及换液
• 2.2.2 人前列腺癌DU-145细胞的传代培养
• 2.3 实验用药的配制
• 2.3.1 得力生注射液的配制
• 2.3.2 足叶乙甙的配制
• 2.4 观测指标及检测方法
• 2.4.1 DU-145细胞形态学观察
• 2.4.1.1 标本制备
• 2.4.1.2 标本的染色步骤
• 2.4.1.3 形态学观察
• 2.4.2 得力生注射液对DU-145细胞增殖的影响
• 2.4.2.1 铺板
• 2.4.2.2 分组与加样
• 2.4.2.3 四甲基偶氮唑盐（MTT）的配制
• 2.4.2.4 细胞增殖抑制率的检测
• 2.4.3 细胞周期及凋亡的检测
• 2.4.3.1 样本的制备
• 2.4.3.2 流式细胞分析
• 2.4.4 bcl-2、bax、Caspase-3、TNFα、Caspase-8的检测
• 2.4.4.1 标本制备
• 2.4.4.2 bcl-2、bax、Caspase-3、TNFα、Caspase-8的染色步骤
• 2.4.4.3 阳性细胞数的观察
• 2.5 统计学处理
• 3.结果与分析
• 3.1 形态学变化
• 3.2 得力生注射液对DU-145细胞生长的影响
• 3.2.1 对DU-145细胞增殖的影响
• 3.2.2 对DU-145细胞生长抑制率的影响
• 3.3 得力生注射液对DU-145细胞周期的影响
• 3.4 得力生注射液对DU-145细胞凋亡的影响
• 3.5 得力生注射液对DU-145细胞Bcl-2表达的影响
• 3.6 得力生注射液对DU-145细胞Bax表达的影响
• 3.7 得力生注射液对DU-145细胞Bax/Bcl-2表达的影响
• 3.8 得力生注射液对DU-145细胞Caspase-3表达的影响
• 3.9 得力生注射液对DU-145细胞TNF-α表达的影响
• 3.10 得力生注射液对DU-145细胞caspase-8表达的影响
• 讨论
• 1.中医对前列腺癌的认识
• 1.1 病名的认识
• 1.2 病因的认识
• 1.3 病机的认识
• 1.4 得力生注射液的组方依据
• 2.现代医学对雄激素非依赖性前列腺癌的认识
• 3.选择DU-145细胞的依据
• 4.对照药物足叶乙甙的选择依据
• 5.实验方案的选择依据
• 5.1 MTT法的原理
• 5.2 流式细胞术的原理
• 5.3 免疫细胞化学的原理
• 6 得力生注射液对DU-145细胞体外作用的影响
• 6.1 对DU-145细胞形态学的影响
• 6.2 对DU-145细胞增殖的影响
• 6.3 对DU-145细胞周期的影响
• 6.4 对DU-145细胞凋亡率的影响
• 7.得力生注射液诱导DU-145细胞凋亡的机理探讨
• 7.1 得力生注射液对DU-145细胞凋亡线粒体通路的影响
• 7.1.1 得力生注射液对DU-145细胞Bcl-2表达的影响
• 7.1.2 得力生注射液对DU-145细胞Bax表达的影响
• 7.1.3 得力生注射液对DU-145细胞Bax/Bcl-2比值的影响
• 7.1.4 得力生注射液对DU-145细胞Caspase-3表达的影响
• 7.2 得力生注射液对DU-145细胞凋亡死亡受体通路的影响
• 7.2.1 得力生注射液对DU-145细胞TNFα蛋白表达的影响
• 7.2.2 得力生注射液对DU-145细胞Caspase-8蛋白表达的影响
• 结论
• 问题与展望
• 致谢
• 参考文献:
• 附件一:综述前列腺癌的中医药研究进展
• 附件二:在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果