皮肤恶性黑素瘤中uPA、MMP-9基因甲基化的相关研究

论文摘要

目的:（1）研究皮肤恶性黑素瘤中尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）基因及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）基因启动子区甲基化状态与其mRNA表达的关系。（2）探讨uPA、MMP-9基因甲基化在皮肤恶性黑素瘤发生和发展中的作用。方法:（1）体外培养人表皮恶性黑素瘤A375细胞系,采用MTT法观察S-腺苷甲硫氨酸（SAM）对A375细胞增殖的影响。（2）按不接受和接受不同浓度SAM（100,250,400μmol/L）干预2天,3天,5天,分别将A375细胞系设立为对照组和处理组。采用半定量PCR（RT-PCR）法比较对照组和处理组A375细胞系uPA、MMP-9mRNA转录水平的差异。（3）采用甲基化特异性多聚酶链反应法（MS-PCR）比较两组A375细胞系uPA、MMP-9基因启动子区甲基化状态的变化。结果:（1）MTT结果显示SAM对A375细胞增殖有抑制作用。（2）uPA、MMP-9 mRNA在对照组A375细胞中均显著表达,且基因启动子区分别呈完全去甲基化或部分去甲基化状态。（3）经SAM干预后uPA、MMP-9 mRNA表达不同程度降低,并且SAM对基因转录的抑制作用呈剂量和时间依赖性;同时uPA、MMP-9基因启动子区去甲基化程度逐渐降低,发生不同程度高甲基化。结论:SAM干预后显著降低皮肤恶性黑素瘤A375细胞中uPA、MMP-9mRNA表达,这种表达的降低可能与uPA、MMP-9基因启动子区出现的高甲基化有关。因此,uPA、MMP-9基因低甲基化可能对皮肤恶性黑素瘤发生和发展起一定作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词表
• 前言
• 第一章 材料与方法
• 1 主要实验仪器及试剂
• 2 实验方法及步骤
• 第二章 结果
• 1 SAM对恶性黑色素瘤细胞株A375细胞增殖的影响
• 2 SAM处理前后恶性黑色素瘤细胞株A375细胞中uPA基因mRNA的表达的差异
• 3 SAM处理前后恶性黑色素瘤细胞株A375细胞中MMP-9基因mRNA的表达的影响
• 4 SAM处理前后恶性黑素瘤细胞株A375细胞中uPA和MMP-9基因启动子甲基化状态
• 第三章 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 在读期间发表论文论著