系列脂肪酸钠盐对乳腺癌细胞增殖和凋亡影响的比较研究

论文摘要

目的:比较研究系列脂肪酸钠盐对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:采用乳腺癌MDA-MB-231细胞体外培养,MTT法检测、流式细胞仪分析、倒置显微镜及电镜观察、琼脂糖凝胶电泳检测、免疫组化等方法分析系列脂肪酸钠盐抗癌的效应及机制。结果:①乙酸钠2.5×10-1mol/L5×10-1mol/L,丁酸钠5×10-3mol/L1×10-1mol /L,己酸钠5×10-2mol/L1×10-1mol/L,辛酸钠5×10-3mol/L1×10-1mol/L,作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞,可观察到较明显的增殖抑制作用,且大都具有时间及浓度依赖性。②2 .5×10-1mol/L乙酸钠和1×10-2mol/L辛酸钠作用引起231细胞S期阻滞,5×10-2mol/L己酸钠使得231细胞G2/M期阻滞,而1×10-2mol/L丁酸钠使得231细胞阻滞于G0/G1期。2.5×10-1mol/L乙酸钠和1×10-2mol/L丁酸钠作用于231细胞72h,经流式细胞仪进行DNA含量分析,凋亡率分别为3.68%和6.95%。③形态学观察显示,2.5×10-1mol/L乙酸钠、1×10-2mol/L丁酸钠和1×10-2mol/L辛酸钠作用时有诱导231细胞凋亡的现象,而5×10-2mol/L己酸钠作用时未观察到明显的凋亡现象。并且,2.5×10-1mol/L乙酸钠和1×10-2mol/L辛酸钠作用时还观察到部分细胞出现坏死现象。④琼脂糖凝胶电泳结果显示,2.5×10-1mol/L乙酸钠、1×10-2mol/L丁酸钠、1×10-2mol/L辛酸钠均具有诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用,且丁酸钠组的DNA梯形条带清晰度最高,乙酸钠组次之,辛酸钠组DNA梯形条带清晰度较差。己酸钠实验组无DNA梯形条带出现。⑤1×10-2mol/L丁酸钠、1×10-2mol/L辛酸钠,可以引起231细胞Bcl-2表达下调,而2.5×10-1mol/L乙酸钠、5×10-2mol/L己酸钠对231细胞Bcl-2表达基本无影响。结论:①四种脂肪酸钠盐一定浓度下均具有抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的作用;②丁酸钠使乳腺癌MDA-MB-231细胞周期阻滞于G0/G1期,乙酸钠和辛酸钠使MDA-MB-231细胞周期阻滞于S期,己酸钠使得MDA-MB-231细胞周期阻滞于G2/M期;③1×10-2mol/L丁酸钠具有较好的诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用,2.5×10-1mol/L乙酸钠诱导231细胞凋亡的作用次之, 1×10-2mol/L辛酸钠诱导231细胞凋亡的作用较差, 5×10-2mol/L己酸钠基本不具有诱导231细胞凋亡的作用;④1×10-2mol/L丁酸钠、1×10-2mol/L辛酸钠,可下调MDA-MB-231细胞Bcl-2表达,而2.5×10-1mol/L乙酸钠、5×10-2mol/L己酸钠对231细胞Bcl-2表达基本无影响。说明不同酸对于MDA-MB-231细胞凋亡的调控

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 绪论
• 1.1 问题的提出及研究意义
• 1.2 国内外研究现状
• 1.2.1 乙酸经皮局部注射与肿瘤治疗
• 1.2.2 丁酸与肿瘤细胞凋亡
• 1.2.3 多不饱和脂肪酸与肿瘤细胞凋亡
• 1.3 研究内容与实验设计
• 1.3.1 研究目的及内容
• 1.3.2 实验设计
• 1.4 本课题的创新点
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 细胞系
• 2.1.2 主要试剂与药品
• 2.1.3 主要仪器与设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 细胞复苏
• 2.2.2 细胞传代培养
• 2.2.3 MTT 法检测细胞增殖状况
• 2.2.4 流式细胞仪（FCM）检测细胞周期分布和凋亡率
• 2.2.5 倒置显微镜观察细胞形态
• 2.2.6 Giemsa 染色观察（凋亡）细胞形态变化
• 2.2.7 透射电子显微镜观察细胞超微结构
• 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA 梯带的形成
• 2.2.9 免疫组化SABC 法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2 表达变化
• 2.2.10 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 MTT 检测结果
• 3.1.1 最佳接种浓度及接种时间的选择
• 3.1.2 MDA-MB-231 细胞的生长曲线
• 3.1.3 药物对MDA-MB-231 细胞的增殖抑制
• 3.2 流式细胞仪（FCM）检测细胞周期分布和凋亡率
• 3.2.1 乙酸钠组
• 3.2.2 丁酸钠组
• 3.2.3 己酸钠组
• 3.2.4 辛酸钠组
• 3.3 倒置显微镜观察结果
• 3.3.1 乙酸钠组
• 3.3.2 丁酸钠组
• 3.3.3 己酸钠组
• 3.3.4 辛酸钠组
• 3.4 Giemsa 染色观察结果
• 3.5 透射电子显微镜观察结果
• 3.6 琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA 梯带的形成
• 3.7 SABC 法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2 表达变化
• 4 讨论
• 4.1 MTT 检测药物对MDA-MB-231 细胞的增殖抑制
• 4.2 药物诱导细胞凋亡的检测与检测方法的选择
• 4.2.1 细胞凋亡检测方法的选择
• 4.2.2 药物对细胞周期分布及凋亡率的影响
• 4.2.3 药物作用后细胞的形态学观察
• 4.2.4 药物诱导细胞凋亡的DNA 降解分析
• 4.3 细胞凋亡相关基因Bcl-2 在凋亡前后的表达
• 4.4 几种脂肪酸诱导MDA-MB-231 细胞凋亡的比较分析
• 5 全文总结
• 5.1 主要结论
• 5.2 后续工作建议
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 独创性声明
• 学位论文版权使用授权书