肥胖小鼠下丘脑NPY、AGRP的变化及其与瘦素的关系

论文摘要

目的：检测不同周龄肥胖及正常小鼠下丘脑组神经肽Y（neuropeptide Y,NPY）、刺鼠相关蛋白（Agouti—related protein,AGRP） mRNA及蛋白的表达以及血浆瘦素水平,比较肥胖小鼠及正常小鼠上述指标的差异；探讨肥胖小鼠及正常小鼠不同周龄下丘脑组织NPY、AGRP表达的变化规律及其与瘦素的关系,为进一步研究肥胖的发病机制提供科学依据。方法：选用健康C57/b16乳鼠60只（周龄6周,雌雄各半）,随机分为对照组（24只）和试验组（36只）。对照组喂养普通饲料,实验组喂养高脂饲料。喂养至12周时,随机选择对照组12只,实验组18只,称体重（Wt）后按照“体重>对照组体重均数+2倍标准差”筛选出肥胖小鼠11只,测量体长,眼球取血并取下丘脑组织。剩余小鼠喂养至24周时对照组12只及实验组筛选的肥胖小鼠13只,测量体长,眼球取血并取下丘脑组织和肠系膜周围脂肪组织。小鼠全血离心后取上层血清,葡萄糖氧化酶法检测其空腹血糖（FPG）,全自动生化分析仪检测甘油三脂（TG）,酶联免疫法（ELISA）法分别检胰岛素（fasting insulin）,瘦素（leptin）指标,计算Lee’s指数[体重（g）1/3×1000/身长（cm）]及稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR=血糖×胰岛素/22.5）。TRIZOL法提取小鼠下丘脑的mRNA, RT-PCR检测NPY、AGRP表达；荧光定量PCR法检测下丘脑NPY、AGRPmRNA含量；提取下丘脑组织蛋白,用Western blot检测下丘脑NPY、AGRP的表达；脂肪组织HE染色观察脂肪细胞大小。结果：①与同周龄对照组小鼠相比,12周及24周肥胖组小鼠Wt、Lee’s指数、FPG、TG、LEP、FINS及HOMA-IR均升高。②在肥胖组小鼠中,24周龄较12周龄小鼠血清胰岛素、瘦素及HOMA-IR增加。对照组小鼠中24周瘦素水平高于12周,但胰岛素及HOMA-IR无差异。③相同放大倍数视野下,肥胖组小鼠脂肪细胞数目较正常组减少,脂肪细胞面积增大；正常组及肥胖组24周脂肪细胞数目均较12周减少,脂肪面积增大。④与同周龄对照组小鼠相比,12及24周龄肥胖组小鼠下丘脑组织NPYmRNA、AGRPmRNA及蛋白表达增加。⑤在肥胖组小鼠中,24周龄小鼠下丘脑组织NPY、AGRPmRNA及蛋白表达高于12周龄。⑥在对照组小鼠中,24周龄小鼠下丘脑组织NPY及AGRPmRNA及蛋白表达与12周龄组比较差异无显著性。⑦直线相关分析显示,肥胖小鼠血清瘦素与下丘脑组织NPY、AGRP表达正相关。结论：①肥胖小鼠较正常小鼠下丘脑NPY mRNA、AGRP mRNA及蛋白表达增加。②随着周龄增加,肥胖小鼠下丘脑NPY mRNA、 AGRPmRNA及蛋白表达呈增加趋势；正常小鼠下丘脑NPY mRNA、 AGRPmRNA及蛋白表达差异无显著性。③随着周龄增加,肥胖小鼠及正常小鼠血清瘦素表达均呈增加趋势,但肥胖组差异更为显著,肥胖小鼠下丘脑组织NPY、AGRP的表达与瘦素水平呈正相关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 中英文缩写对照
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验对象
• 2.3 实验方法
• 2.4 计算基因相对表达量
• 2.5 统计分析
• 2.6 实验流程图
• 第三章 实验结果
• 3.1 各组小鼠体重、Lee's指数、血糖、血脂的比较
• 3.2 各组小鼠胰岛素、瘦素和HOMA-IR的比较
• 3.3 各组别小鼠肠系膜周围脂肪细胞比较
• 3.4 琼脂糖凝胶电泳检测下丘脑组织NPY及AGRPmRNA的表达
• 3.5 荧光定量PCR检测下丘脑组织NPY及AGRPmRNA的表达
• 3.6 下丘脑中NPY、AGRP的表达
• 3.7 下丘脑NPY、AGRP蛋白表达与各观察指标之间的相关性分析
• 第四章 讨论
• 4.1 肥胖小鼠血清各指标的变化
• 4.2 下丘脑组织中NPY、AGRPmRNA及蛋白的表达及与肥胖的关系
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述 NPY、AGRP与瘦素及肥胖
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间的主要研究成果