论文摘要
目的研究来源于超排卵周期中行卵胞浆内单精子注射（Intracytoplasmic SpermInjection，ICSI）治疗患者的未成熟卵母细胞，在未添加激活素-A（activin-A，ACT-A）的对照组和分别添加ACT-A 1ng／ml、10ng／ml、100ng／ml的培养液中进行体外成熟培养（In vitro maturation，IVM）后的成熟率、正常受精率、异常受精率、卵裂率和优质胚胎率，分析ACT-A在IVM中的最佳浓度和最佳培养时间，进一步探讨ACT-A的作用机制，为临床工作提供实验基础；通过透射电子显微镜观察处于不同浓度-时间因素的IVM培养条件下，不同阶段的优质和非优质卵母细胞，对照其超微结构进行分析，以判断卵母细胞的胞膜、胞质和胞核的成熟度，进而为ACT-A在IVM中以及早期胚胎发育中的作用提供形态学依据。方法1、取超促排卵周期中行ICSI治疗患者的未成熟卵母细胞为研究对象；2、将实验对象根据ACT-A的四种不同浓度（0ng／ml，1ng／ml，10ng／ml，100ng／ml）和三种不同培养时间（24h，30h，48h）随机分为12个组，分别行体外成熟培养，然后记录其成熟率、正常受精率、异常受精率、卵裂率和优质胚胎率，进行统计学分析；3、透射电子显微镜下观察不同实验组、不同时期卵母细胞的的超微结构。结果1、培养时间30h组，各浓度组组间除正常受精率无统计学差异外，其余观察指标组间均存在差异性（P＜0.05）。而从组内两两比较的方差分析（q检验）结果可以得出，在成熟率方面，100ng／ml组显著高于对照组（P＜0.005）；正常受精率方面，100ng／ml组高于对照组和10ng／ml组，差异有统计学意义（P＜0.05），10ng／ml组高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；异常受精率方面，各浓度组均低于对照组，存在显著统计学差异（P＜0.005）；卵裂率和优质胚胎率方面，100ng／ml组高于对照组和1ng／ml组，差异存在统计学意义（P＜0.05）。2、随着ACT-A浓度的增加，不同时间组的成熟率、正常受精率、卵裂率和优质胚胎率均随着浓度的增加而升高，呈浓度依赖趋势，同时异常受精率是降低的，其中30h组浓度依赖的趋势最为明显。3、ACT-A 100ng／ml组在不同的培养时间卵裂率方面组间存在统计学差异（P＜0.05）。而从组内两两比较的方差分析（q检验）结果可以得出，培养时间30h的卵裂率要显著的高于24h组和48h组，存在显著统计学差异（P＜0.005）；同时24h组的优质胚胎形成率方面低于30h组，也有统计学差异（P＜0.05）。增加培养时间至48h并未表现出对IVM以及胚胎早期的发育起到明显的促进作用。4、各观察指标均未表现出浓度与时间的交互效应，无统计学意义（P＞0.05）。5、透射电镜示对照组培养24h的卵母细胞表现为胞核和胞质成熟的不同步，而100ng／ml组培养30h和48h的卵母细胞胞核和胞质成熟的同步性较好。结论1、ACT-A在卵母细胞的IVM以及胚胎的早期发育中都有一定的促进作用，这种作用可以随着ACT-A浓度的升高而增强，呈浓度依赖趋势。2、ACT-A100ng／ml，培养时间30h，可以得到比较令人满意的成熟率、正常受精率、异常受精率、卵裂率和优质胚胎率。3、延长培养时间虽对于促进卵母细胞的同步成熟方面有一定的作用，但在卵子的成熟率、受精率以及胚胎的早期发育方面，无显著的作用。因此，为方便和满足临床工作需要，采取培养时间30h更为科学。4、超促排卵周期中的未成熟卵母细胞，只要在合适的条件下进行工VM，同样可以达到比较满意的效果。虽与体内成熟卵存在差距，但增加了可移植胚胎和冷冻胚胎的数量，增加了移植周期，减少了取消周期，对IVF有积极的补充作用。