论文摘要
目的:本研究旨在了解小鼠精子甘露糖受体(mannose receptor,MR)与巨噬细胞MR 之间是否具有基因同源性。方法:从小鼠腹腔巨噬细胞提取总RNA,RT-PCR 方法获得巨噬细胞MR 基因特异性片段即其编码识别甘露糖的C 型凝集素样区域的454bp 序列,将之克隆至pGEM-T Easy 质粒载体上,测序证实与Genbank 登录的小鼠巨噬细胞MR 基因序列一致。将此带有巨噬细胞MR 特异性基因片段的质粒分别经NcoⅠ和SalⅠ酶切制成线性模板,在体外用T7 RNA 聚合酶和SP6RNA 聚合酶转录出地高辛标记反义RNA 探针和正义RNA 探针,采用RNA-RNA 非放射性原位杂交方法在小鼠睾丸组织标本上进行原位杂交,NBT/BCIP 显色,检测巨噬细胞MR 特异性基因片段在小鼠睾丸组织中的表达情况。结果:1.DNA 测序证实重组质粒中插入的小鼠巨噬细胞MR 特异性基因片段cDNA序列准确无误;2.体外转录出小鼠巨噬细胞MR 基因特异性片段地高辛标记反义RNA 探针和正义RNA 探针;3.原位杂交结果显示:在小鼠睾丸生精小管的各级生精细胞胞浆中均未检测到杂交信号。结论:1.成功转录出小鼠巨噬细胞MR 基因特异性片段地高辛标记反义RNA 探针和正义RNA 探针;2.小鼠精子MR 基因与巨噬细胞MR 基因之间可能不具有高度同源性。
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