导读:本文包含了体外诱导分化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:骨髓间充质干细胞,1,25-维生素-D_3,心肌样细胞,细胞分化
体外诱导分化论文文献综述
刘洋,吕洋,王浩宇,李娇,任君旭[1]（2019）在《1,25-维生素-D_3体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的最适浓度》一文中研究指出目的探讨1,25-维生素D_3(1,25-vitamin-D_3)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,应用3、6、12、24 nmol/L 1,25-vitamin-D_3对第2代BMSCs进行定向诱导,倒置相差显微镜下动态观察细胞生长状况。运用流式细胞仪对BMSCs进行鉴定。应用免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测诱导后4周的BMSCs原肌球蛋白(TPM)、间隙连接蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达情况。运用透射电子显微镜观察分化细胞与心肌细胞类似的超微结构。在诱导后1、2和4周这3个时间点,以Real-time PCR法检测细胞心肌早期转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)、Nkx2.5的表达。结果 1.倒置相差显微镜下观察,原代细胞培养72 h后,大部分细胞呈短梭形;培养1周后,细胞呈现出多样化的形态;诱导4周的BMSCs,相邻细胞间联系紧密,排列具有明显的方向性。不同浓度1,25-vitamin-D_3诱导后的BMSCs,其数量及形态存在差异。2.流式细胞术的鉴定结果显示,CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.4%、3.3%和91.4%。3.免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测不同浓度1,25-vitamin-D_3诱导4周后的BMSCs均可见TPM、Cx43及cTnT的阳性表达,其中6 nmol/L组的表达均最高,而未诱导组细胞呈弱阳性或阴性表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.透射电子显微镜观察,细胞诱导培养至4周,胞质内可见较多平行排列的肌丝及线粒体、核糖体、粗面内质网等细胞器。5.Real-time PCR检测结果显示,GATA4及Nkx2.5基因于诱导后1周表达增强,2周表达减弱,4周表达增强;4个诱导组相比较,6 nmol/L组明显优于其他3组(P<0.05)。结论 1,25-vitamin-D_3可以诱导BMSCs获得心肌分化表型,其诱导分化最适浓度为6 nmol/L。(本文来源于《解剖学报》期刊2019年05期）
刘振东,王瑞,杨建东,王静成[2]（2019）在《胶质细胞源性神经营养因子体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化》一文中研究指出背景:骨髓间充质干细胞作为中胚层来源的多能干细胞,除了能够分化为间充质系细胞如成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞外,还具有神经分化潜能,具有广阔的应用前景。目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的可行性。方法:选用健康SD大鼠,采用全骨髓贴壁法体外培养、纯化骨髓间充质干细胞,经流式细胞仪进行细胞表型鉴定。取生长状态良好的第4代骨髓间充质干细胞进行实验分组:对照组不加任何诱导剂;实验组培养液内加入胶质细胞源性营养因子,调整质量浓度分别为20,50,100μg/L,倒置相差显微镜连续观察细胞生长情况及形态变化。诱导6,12,24,48,72 h,采用免疫组化法检测巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶的表达。结果与结论:①原代提取获得的骨髓间充质干细胞形态均一性较好,流式细胞仪检测结果为CD44,CD90呈强阳性表达,CD34,CD45阳性表达率很低;②经胶质细胞源性营养因子诱导后,细胞胞体逐渐向胞核收缩,变形细胞逐渐增多,出现双极、多极和锥形等典型的神经元样细胞形态,细胞边缘出现突起,且与邻近细胞突起逐渐相互连接;③胶质细胞源性营养因子诱导6 h后出现巢蛋白表达阳性,24 h后达顶峰,50,100μg/L胶质细胞源性营养因子组巢蛋白表达显着高于20μg/L胶质细胞源性营养因子组。胶质细胞源性营养因子诱导12h后检测到神经元特异性烯醇化酶表达阳性,且表达强度随时间延长逐渐增加,48h后达顶峰,50,100μg/L胶质细胞源性营养因子组巢蛋白表达显着高于20μg/L胶质细胞源性营养因子组。对照组未见明显神经元样细胞的形态变化及特异性标志的阳性表达;④结果表明,大鼠骨髓间充质干细胞可通过全骨髓贴壁法在体外进行原代提取分离及传代培养,经胶质细胞源性营养因子诱导后具有向神经元样细胞分化的潜能。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年29期）
王姣杰,安慧娟,单泓,韩小改,别立莉[3]（2019）在《体外诱导外周血造血干细胞分化为成熟红细胞》一文中研究指出背景:随着人口老龄化、医疗技术不断的更新,红细胞需求呈增加趋势,血液供应也日趋紧张。体外制备可供临床应用的血液制品成为众多专家关注的热点,而体外诱导造血干细胞向成熟红细胞分化是获得新型血源的可能途径之一。目的:探讨采用叁阶段悬浮培养体系诱导外周血废弃白膜层来源造血干细胞向成熟红细胞分化及体外生产成熟红细胞的可行性。方法:经河南省红十字血液中心伦理委员会批准,采用外周血废弃白膜层为原料(献血者均知情同意),分离出CD34~+细胞,以此为种子细胞,采用叁阶段21 d悬浮培养体系体外诱导造血干细胞向成熟红细胞分化,分别在第4,7,9,11,13,15,17,19,21天进行细胞计数,绘制细胞生长曲线,了解细胞生长情况;在第7,11,15,19,21天进行细胞涂片和瑞氏-吉姆萨染色,显微镜下观察细胞形态学变化;在培养第7天时,采用流式细胞仪检测红系早期分化情况;在第7,11,15,17天时,采用流式细胞仪检测红系终末分化情况;在第15,17,19天时,采用流式细胞仪检测脱核率。结果与结论:①随着培养天数增加,细胞呈增加趋势,到第17天达高峰,细胞扩增约1 300倍,之后趋于平稳状态;②随着培养天数的增加,细胞从原幼红细胞向嗜碱性幼红细胞、多染幼红细胞、正染幼红细胞分化,培养至21 d时,几乎全部分化为脱核红细胞;③红系早期分化情况:IL-3R/GPA双阴性细胞占(15.8±0.21)%,其中红系爆发集落形成单位(BFU-E)占(0.98±0.21)%,红系祖细胞克隆形成单位(CFU-E)占(8.13±1.42)%;④红系终末分化情况:随着细胞培养天数的增加,GPA表达也逐渐增加,培养至第17天时,接近90%的细胞表达GPA,表明造血干细胞定向红系分化较为成功;⑤随着培养天数的增加,无核红细胞越来越多,至第19天80%以上均为无核红细胞;⑥结果表明,采用叁阶段21 d悬浮培养体系,体外诱导来自废弃白膜层的外周血造血干细胞向成熟红细胞分化,可以生产成熟红细胞,且能达到较高脱核率。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年29期）
王晨宇,张曼玲,姜海滨,金永,赵丽华[4]（2019）在《猪naive-like胚胎干细胞向神经细胞体外诱导分化》一文中研究指出目的:将猪naive-like胚胎干细胞体外定向诱导分化为神经细胞,为猪多能干细胞诱导神经分化方法的建立提供参考。方法:利用小分子化合物β-巯基乙醇、B-27、肝素等组成的神经诱导培养液,采用直接分化法,分化得到神经样细胞,对其进行神经特异性基因表达鉴定,同时检测分化后的细胞是否已经丧失多能性。结果:分化所得到的神经细胞具有明显的神经细胞结构特征,RT-PCR和免疫荧光结果显示分化后的神经细胞表达多种神经细胞特异性基因,qPCR结果显示分化后多能因子的表达显着降低,神经特异性基因表达显着升高,免疫荧光结果经统计分析后显示,低分子量神经微丝蛋白(light neurofilament protein,NF-L)阳性细胞率可达79%。结论:成功实现了体外直接诱导猪naive-like胚胎干细胞向神经细胞分化,为神经系统疾病修复与治疗研究奠定了基础。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2019年06期）
刘志强,李妍,杨小娟,李慧宁,韩远豪[5]（2019）在《骨髓基质细胞体外诱导小鼠肌源性干细胞造血分化初步研究》一文中研究指出目的研究骨髓基质细胞(BMSC)对小鼠肌源性干细胞(MDSC)体外造血分化的影响并探讨作用机制。方法选择6～8周龄C57BL/6雄性小鼠4只;5 d龄C57BL/6小鼠10只,雌雄不限。采用密度梯度离心法获取6～8周龄小鼠BMSC;同时利用混合酶消化联合磁珠分选法分离5d龄小鼠后肢骨骼肌干细胞抗原1阳性(SCA-1~+)MDSC,建立以BMSC为饲养细胞的共培养体系。MDSC随机分为3组,对照组为新鲜分离的MDSC,单培养组和共培养组分别进行单独培养或与BMSC共培养7 d。采用相差显微镜观察细胞形态;免疫细胞化学(ICC)法检测SCA-1表达;Western blot检测造血相关分子CD34和CD45表达,相对灰度法分析数据;real-time RT-PCR检测Wnt信号通路相关分子的转录水平,数据采用AACt相对定量法分析。结果富集的MDSC胞体小而圆,表达SCA-1;单培养组细胞贴壁生长,呈梭形或纺锤形,可形成多核肌管;共培养组除少量细胞贴壁生长外,可见大量小圆细胞悬浮生长;与对照组相比,单培养组CD34和CD45表达未见显着变化,共培养组显着提高,差异有明显统计学意义(CD34,t=9.068,P=0.010;CD45,t=4.860,P=0.018);在基因转录水平,与对照组比较,单培养组Wnt5a转录水平提高(t=7.395,P=0.018),共培养组Wnt2、Wnt3、CCND1和myc表达上调(Wnt2, t=4.964,P=0.008;Wnt3,t=9.513,P=0.010;CCND1,t=9.688,P=0.010;myc,t=7.985,P=0.005)。结论 MDSC单独培养时以成肌分化为主;与BMSC共培养时发生造血分化,机制可能与激活经典Wnt信号通路有关。(本文来源于《生物医学工程与临床》期刊2019年03期）
张建烨[6]（2019）在《体外诱导脂肪干细胞分化用于构建组织工程化肾脏的研究》一文中研究指出研究背景:慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是一种严重威胁人类健康的全球性疾病,且近年来发病率有逐年增高的趋势。据统计,在我国终末期肾病(end stage renal diseases,ESRD)的患者约有十余万人之多,已经成为一个严重的社会问题。成人肾脏具有一定数量的肾单位,一旦受损很难再生。然而目前对于终末期肾病并没有理想有效的治疗方式,现今的治疗主要有两种:透析和肾脏移植。透析治疗严重影响着患者的生活质量,并且使患者家庭承担了巨大的经济负担。且长时间的透析会产生心血管疾病、骨病等多种并发症。肾脏移植是当前治疗ESRD最有效的治疗方法,但是供体短缺及严重的免疫排斥反应很大程度上限制了其广泛应用。因此,对于临床医生来说迫切地需要寻找一种新的治疗ESRD措施。肾脏再生的目的在于在建立一个具备完整肾脏结构和功能的人工肾脏,目前肾脏再生的策略主要有六种:囊胚互补,体外诱导肾脏类器官,后肾移植,成体肾脏干细胞,生物人工肾(bioartificial kidney,BAK)和脱细胞肾支架(decellularized kidney scaffold,DKS)。囊胚互补是指在sall1基因缺失的小鼠囊胚内通过显微注射外源性干细胞,使干细胞与囊胚共同发育并形成嵌合体,进而获得外源性干细胞来源的肾脏,该方法的优点在于细胞来源可自主选择并且可获得完整肾脏,但是由于外源干细胞和囊胚所产生的嵌合体存在严重的伦理问题,因此并不能成为理想的肾脏再生方法。肾脏类器官研究,干细胞是一种能够向各种细胞类型分化的细胞类型,通过向培养基中添加生长因子可以体外诱导多能干细胞向肾系分化,而后通过3D培养可以获得具有立体结构的肾脏类器官,期望通过细胞的自我组装成为组织器官。其缺点是缺乏血管供应,且分化效率较低。后肾移植是通过解剖获取胚胎期的后肾组织移植到肾衰动物体内,可以一定程度上缓解肾衰程度,后肾细胞处于肾脏前体细胞或肾脏祖细胞发育阶段,因此具有较高的多能性,并且免疫原性较低,但是因为需要使用胚胎肾脏进行移植,同样存在伦理问题,限制了临床应用。肾脏干细胞是成体干细胞中研究最晚的一类干细胞,理论上肾乳头为肾脏干细胞的壁龛,通过分离肾脏干细胞并在体外培养,可在培养分化出肾脏细胞,用于肾脏再生研究。但是目前对于肾脏干细胞的研究主要集中在发育中的胚胎肾。研究表明,肾脏干细胞来源于输尿管芽诱导的后肾间质,但当前对肾脏成体干细胞的分离技术尚不成熟,还有待深入研究。生物人工肾是将工程科学技术与再生医学相结合的装置,用以起到替代肾脏功能的作用,该技术能够一定程度上维持尿毒症患者在肾功能衰竭状态下的生存。干细胞结合肾脏脱细胞支架构建组织工程肾脏是一种实现肾脏再生的新方法,有望能够起到肾脏替代治疗的作用,因此成为近年来再生医学研究的热点课题之一。肾脏脱细胞支架技术是指将动物成体的肾脏组织经化学和物理方法去除原本肾脏中的自体细胞,剩余无免疫原性或低免疫源性的细胞外基质,将其作为生物材料用于构建组织工程支架,而后使用成体细胞或者干细胞灌注脱细胞支架使之再细胞化,经过一段时间的共培养获得具有一定功能的组织工程肾脏。脱细胞支架由于原本的供体细胞被洗脱因而免疫源性大大降低,并且保留了正常肾脏的结构和细胞外因子,有利于种子细胞在支架内的生长和分化。对于种子细胞的选择,正常肾脏中细胞种类较为复杂,难以选择一种或者几种成体细胞进行肾脏再生。近年来对干细胞的研究日益深入,干细胞具有多向分化且无限增殖的特性,能够在不同的环境条件下向不同的细胞类型分化,因此是一类比较理想的种子细胞类型。先前的研究中曾利用胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESCs)、脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)、大鼠后肾间质细胞等结合脱细胞支架进行肾脏再生研究,但是上述细胞均存在伦理问题而不能进一步应用于临床。脂肪干细胞(Adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)是一种易于获取、容易培养并且具有多项分化潜能的干细胞类型。脂肪干细胞来源于中胚层,在特异性生长因子和环境的影响下可以跨越胚层分化。间介中胚层(Intermediate mesoderm,IM)是中胚层阶段的一部分,其主要的分化方向为肾脏和性腺,是肾实质结构的来源。研究目的:本实验拟采用脂肪干细胞在体外环境下通过添加诱导因子诱导其分化为间介中胚层细胞,之后用于对肾脏脱细胞支架的再细胞化,从而构建有肾脏结构和部分功能的组织工程肾脏。研究方法:1.分离、培养原代ADSCs:取大鼠腹股沟脂肪垫脂肪,经过消化离心等步骤获取原代脂肪干细胞,传至第四代用于后续实验,通过光镜观察细胞形态,诱导成脂分化,14天后进行油红O染色,成骨分化21天后进行茜素红染色,成软骨分化21天后进行阿利新蓝染色,鉴定其成脂、成骨、成软骨特性。利用流式细胞仪检测CD29,CD34,CD45,CD90,CD105的表达情况。2.诱导ADSCs向间介中胚层细胞分化:在不同时间节点依次向ADSCs培养基中加入CHIR99021和FGF9因子,诱导作用7天后获得间介中胚层细胞。通过光学显微镜对比诱导前后细胞形态变化,利用免疫荧光鉴定间介中胚层特异性标志物OSR1,PAX2的表达情况。Western blot重复验证OSR1,PAX2的表达,同时以小鼠9.5天胚胎体节后部组织作为阳性对照。3.脱细胞支架的制备:选取体重约250g的wistar大鼠,使用10%水合氯醛麻醉。之后做腹部正中切口并暴露腹主动脉,通过24G套管针灌注无菌PBS水冲出肾脏内血液,摘除肾脏后分别通过肾动脉和输尿管留置24G和26G套管针。应用0.5%十二烷基硫磺酸钠(Sodium-dodecyl sulphate,SDS)持续灌注肾脏,洗脱肾脏细胞6小时,再使用无菌PBS冲洗残留SDS后获得可用于后续实验的脱细胞支架。4.对比脱细胞前后的变化:通过HE染色对比正常肾脏和脱细胞支架的形态结构,masson染色观察正常肾脏和脱细胞支架中胶原的表达情况,通过电镜对比肾脏组织和支架的亚显微结构的差异。5.对肾脏组织和脱细胞支架中DNA含量,胶原含量和细胞因子的测定:应用DNA和胶原测定试剂盒检测肾脏组织和脱细胞支架中的DNA和胶原的含量,通过ELISA检测对比肾组织和支架中HGF,VEGF,TGF-β的含量差异,并进行统计学分析。6.脱细胞支架再细胞化:将诱导后获取的IM细胞由肾动脉和输尿管端注入,灌注培养基,持续供氧,共培养10天后收获再细胞化的肾脏,通过HE染色观察支架内细胞贴附情况,利用免疫荧光鉴定肾小管标志物E-CAD,GATA3,足细胞标志物WT1的表达情况。同时将ADSCs灌注支架,单纯体外培养的ADSCs和IM细胞作为对照进行荧光染色。研究结果:1.光学显微镜下观察ADSCs的形态为长梭形,成脂分化14天进行后油红O染色,可见红色脂滴的产生;成骨分化21天后进行茜素红染色,可见骨化结节着色;成软骨分化21天后进行阿利新蓝染色,观察到软骨球被染成蓝色。进行流式细胞鉴定CD29,CD34,CD45,CD90,CD105的表达情况,阳性率分别为99.9%,1.1%,2.4%,100%和97.2%,符合ADSCs的表型。2.经过7天的间介中胚层诱导分化,可以观察到细胞产生形态变化。免疫荧光观察OSR1和PAX2的表达在IM细胞中明显高于ADSCs。Western blot可见OSR1和PAX的阳性表达。3.经过6小时的0.5%SDS脱细胞处理,通过肉眼观察肾脏逐渐变为透明样,表明支架内细胞被从原先肾脏结构上洗脱完全。4.通过HE染色对比脱细胞支架和正常肾脏组织可以发现,脱细胞支架内没有细胞存留,表明脱细胞完全。masson染色观察发现脱细胞过程胶原被完整的保留。扫描电镜观察脱细胞支架微结构与正常肾脏组织相比没有明显破坏。5.DNA测定脱细胞支架中DNA低于正常含量的5%以下;胶原含量与正常组没有明显差异;HGF,VEGF,TGF-β与正常组相比亦无明显改变。6.HE染色观察ADSCs通过动脉、输尿管结合脱细胞支架可以观察到细胞分布于血管、肾小球、肾小管等部位;IM结合脱细胞支架观察到同样的结果。免疫荧光鉴定细胞的分化情况观察E-CAD,GATA3,WT1的表达,可以发现IM在支架中上述标志物的阳性率较ADSCs结合支架组高,且单纯体外培养ADSCs和IM没有观察到上述标志物的表达。研究结论:间介中胚层细胞结合肾脏脱细胞支架后较未经诱导的干细胞结合支架有更高的分化效率。间介中胚层细胞在支架内可以观察到足细胞样和肾小管样细胞的表达。由此说明体外诱导干细胞产生进一步分化后再结合肾脏脱细胞支架是一种可行的肾脏再生策略。同时,肾脏脱细胞支架可以作为一种良好的生物材料用于肾脏再生研究。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-01）
潘倩,章建全,张传森[7]（2019）在《体外诱导骨髓间充质干细胞向甲状腺滤泡细胞分化的实验研究》一文中研究指出目的研究体外诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化成甲状腺滤泡细胞的培养条件,探讨其对BMSCs向甲状腺滤泡细胞分化的诱导作用。方法实验分组:阴性对照组(B组)、阳性对照组(T组)、共培养组(C组)、诱导素组(F组)、共培养+诱导素组(C+F组)。倒置显微镜下观察各组诱导1周后细胞形态的变化;细胞免疫染色法检测甲状腺特有标记物的表达;RT-PCR分析诱导后细胞内甲状腺细胞相关基因表达水平。多组间均数比较使用单因素方差分析ANOVA,两组间资料差异比较采用t检验。结果 SD大鼠BMSCs (P3)诱导1周:(1)细胞免疫染色结果显示各实验组甲状腺转录因子TTF1和PAX8及钠/碘同向转运体(NIS)、甲状腺过氧化物酶(TPO)与甲状腺球蛋白(Tg)表达情况不同,其中以C+F组染色效果显着加深;(2)RT-PCR分析与C+F组比较,B组、C组、F组PAX8 (6.21±0.04,0.02±0.01,0.54±0.03,3.31±0.30,F=283.07,P <0.05)、TTF1 (0.33±0.04,0.03±0.01,0.15±0.03,0.08±0.02,F=73.36,P <0.05)、TG (14.90±2.00,0.10±0.05,1.61±0.40,1.91±0.39,F=134.03,P <0.05)mRNA水平下降。结论在体外BMSCs与FRTL-5间接接触共培养体系中添加TSH、胰岛素、转铁蛋白、生长抑素及氢化可的松可诱导BMSCs分化为表达甲状腺滤泡细胞特异抗原的细胞。(本文来源于《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》期刊2019年02期）
张焕超[8]（2019）在《国产多孔钽对体外诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响》一文中研究指出目的 研究TGF-β1和IGF-1对国产多孔钽复合SD大鼠BMSCs向软骨细胞诱导,观察多孔钽-BMSCs复合物细胞分泌功能及对软骨相关因子COL-II、AGG和COL-X表达影响,从而探讨国产多孔钽复合BMSCs后对软骨损伤修复的影响,以期为临床软骨修复提供理论与实验依据。方法 1肉眼及扫描电镜观察国产多孔钽支架材料的形态特征。2 SD大鼠BMSCs的获取、培养、纯化。3 BMSCs鉴定:取第3代BMSCs,进行成骨细胞、成软骨细胞、成脂细胞诱导14天,分别行茜素红、Alcian blue、油红O染色。4国产多孔钽与第3代BMSCs共培养,CCK-8测定BMSCs不同时间点细胞的增殖。5第3代BMSCs与多孔钽共培养,成软骨诱导SEM和TEM观察细胞生长情况。6实验分组:TGF-β1+BMSCs组(A组)、TGF-β1+BMSCs+多孔钽组(B组)、TGF-β1+IGF-1+BMSCs组(C组)、TGF-β1+IGF-1+BMSCs+多孔钽组(D组)。7各组成软骨诱导7、14、21天行ELISA检测国产多孔钽支架复合BMSCs后细胞分泌COL-II、AGG、COL-X功能的影响。8各组成软骨诱导7、14、21天行qPCR检测多国产孔钽支架复合BMSCs后细胞分泌COL-II、AGG、COL-X mRNA表达的影响。9各组成软骨诱导7、14、21天行Western-blot检测国产多孔钽支架复合BMSCs后细胞分泌COL-II、AGG、COL-X蛋白表达的影响。结果 1国产多孔钽支架材料的直径约为15mm,厚度约为3mm,外观为圆盘状,色灰白,支架表面凹凸不平,可见均匀分布的蜂窝状孔隙。扫描电镜下观察,国产多孔钽支架具有大量均匀分布的微孔结构,孔隙间相互连通呈现叁维多孔结构,与人体松质骨结构相类似。2原代BMSCs贴壁细胞较少,分布分散,呈梭形,不规则形,少部分呈圆形。传代细胞随培养时间延长而逐渐增多,细胞呈长梭形,细胞形态均一。3 BMSCs鉴定结果:成骨、成软骨、成脂诱导14天后,茜素红染色、Alcian blue染色、油红O染色均呈阳性。4 CCK-8检测细胞生长结果:在第3d和第5d,单纯BMSCs组细胞生长优于多孔钽-BMSCs组,差异有统计学意义(P<0.05);第1d、7d、9d、11d细胞增殖比较均无统计学差异(P>0.05)。5 SEM和TEM结果:诱导后的BMSCs嵌入到多孔钽的小梁结构中,细胞生长良好。6 ELISA结果提示:第7d、14d和21d,A组与B组,C组与D组间COLII、AGG、COL-X分泌量均无统计学差异(P>0.05);但组间比较提示C组和D组COL-II、AGG分泌量高于A组和B组(P<0.05);而COL-X分泌量低于前者(P<0.05);随着时间延长,各组COL-II、AGG分泌量逐渐增加(P<0.05),COL-X分泌量逐渐减少(P<0.05)。7 QPCR结果显示:在叁个时间点,A组与B组,C组与D组间COL-II、AGG、COL-X mRNA的表达无统计学差异(P>0.05);但组间比较提示C组和D组COL-II、AGG mRNA的表达高于前者(P<0.05);而COL-X mRNA的表达低于前者(P<0.05)。8 Western-blot结果显示:在叁个时间点,A组与B组,C组与D组间COL-II、AGG、COL-X蛋白的表达无统计学差异(P>0.05);但组间比较提示C组和D组COL-II、AGG蛋白的表达高于前者(P<0.05);而COL-X蛋白的表达低于后者(P<0.05);随着时间的延长,各组COL-II、AGG蛋白的表达逐渐增高,COL-X蛋白的表达逐渐降低(P<0.05)。结论 成软骨性细胞因子IGF-1、TGF-β1与国产多孔钽材料复合培养能促进SD大鼠BMSCs向软骨细胞分化,加速软骨形成。IGF-1/TGF-β1/BMSCs/多孔钽复合物能使成软骨过程中成软骨因子COL-II、AGG基因及蛋白呈高表达,而COL-X基因及蛋白呈低表达。从而降低软骨细胞去分化,促进软骨细胞分化。图22幅;表17个;参96篇。(本文来源于《华北理工大学》期刊2019-04-01）
马小草[9]（2019）在《金纳米粒子在体外诱导破骨细胞分化中的作用》一文中研究指出研究目的:纳米科技与生物医疗相结合已不再是全新话题,其中金纳米材料具备优良的理化性质、易被其他物质进行表面修饰等特性受到医学领域的热议。但是,纳米粒子的细胞毒性为其在医学中的应用带来困扰,明确其生物安全性将为金纳米粒子(Gold Naonoparticles,GNPs)在医学领域的长足发展提供基础。同时金纳米材料在骨组织再生中的作用一直受到关注,分析其在破骨细胞分化中的作用,将为其牙种植体涂层与骨结合方面的研究提供助益。本实验拟对金纳米粒子进行表征测定,并将不同浓度、不同粒径的金纳米粒子作为变量,对小鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养,分析GNPs的理化性质、生物学相容性及对破骨细胞分化的抑制作用;并从活化T细胞核因子(nuclear factor-activated T cell 1,Nfatc 1)、c-fos 及抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate Resistent Acid Phosphatase,TRAP)基因入手,研究这些基因在GNPs体外诱导破骨细胞分化中的表达变化。研究方法:对金纳米粒子溶液进行扫描电镜及透射电镜检测,确定粒径大小;并明确金纳米粒子的Zeta电位,从而对其物理性质进行分析;取小鼠骨髓细胞,培养于含有巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage Colony Stimulating Factor,M-CSF)的培养基中,孵育并筛分高纯度骨髓间充质干细胞;进行CCK8细胞毒性活力检测不同粒径及浓度的GNPs的生物相容性。通过加入核因子κ B受体活化因子配体(Receptor Activator of Nuclear Factor-κ B Ligand,RNAKL)对骨髓间充质干细胞进行诱导,作为阳性对照组,以不同粒径及叁种等差浓度金纳米粒子作为实验组。在不同时间点对细胞进行分化状态的观察,及TRAP染色计数,从而比较不同浓度,不同粒径金纳米粒子诱导破骨细胞数量及分化程度。选出具有优良生物相容性及抑制破骨细胞分化作用的金纳米粒子,确认其浓度及粒径尺寸,进行RT-PCR检测Nfatc 1、c-fos、TRAP基因水平的差异。研究结果:电镜结果示金纳米粒子呈现卵圆形,分散均匀,未见明显团聚;Zeta电位为-5.68 mV;同时显微镜下见取得骨髓间充质干细胞形态及大小较为一致,分布均匀广泛,细胞形态多为多边形,长梭形,卵圆形不等,细胞体积均一。CCK-8细胞毒性活力结果示:在同一粒径条件下,50 ng/ml组金纳米粒子的细胞毒性明显,而30 ng/ml组及10 ng/ml组与空白对照组相比,未见差异。TRAP染色结果显示:在相同的诱导时间,相同浓度条件下,实验组细胞较阳性对照组细胞体积更小,TRAP阳性多核细胞数目更少,细胞形态多样;且20 nm实验组细胞呈多边形,TRAP 阳性多核细胞数目较40 nm实验组更少,有统计学差异;当诱导时间,GNPs粒径相同时,见10 ng/ml实验组较30ng/ml、50ng/ml组TRAP 阳性多核细胞占比最少,体积较小,细胞呈多角形。选择110ng/ml、20 nm直径的球形金纳米粒子行RT-PCR检测结果显示:Nfatc 1、c-fos以及TRAP趋势相似,基因表达量:阳性对照组>实验组>空白对照组,差异具有统计学意义(p<0.05)。实验结论:本实验所使用的球形金纳米粒子粒径均一,分散均匀,带有负电荷,呈现了优良理化性质。所取的小鼠骨髓细胞为高纯化的骨髓间充质干细胞。特定粒径的金纳米粒子可被细胞充分内吞于胞质内,且具有较好的生物相容性。GNPs具有抑制破骨细胞分化能力,呈现浓度依赖性、尺寸相关性。其抑制作用可能是通过抑制破骨相关基因Nfatc 1、c-fos、TRAP实现的。(本文来源于《山东大学》期刊2019-03-14）
王建,杨清,徐卉,刘修信,冉建[10]（2019）在《SHH体外诱导人牙髓干细胞向成骨细胞分化的研究》一文中研究指出目的研究体外使用音猬因子(sonic hedgehog,SHH)体外诱导人牙髓干细胞(dental pulp stemcells,DPSCs)分化为成骨细胞的可行性,以优化DPSCs向成骨细胞分化的诱导条件。方法从因正畸或阻生拔除的第一前磨牙或第叁磨牙中进行牙髓的提取,通过酶消化法和过滤法获得单细胞悬液,之后再采用有限稀释法对分离出来的原代DPSCs进行培养,克隆化培养,对基质细胞抗原(stromal cell antigen-1,STRO-1)的表达进行检测。MTT法检测SHH因子对细胞增殖能力的影响,通过RT-PCR实验进行成骨向特异的基因I型胶原(type-I collagen,COL-I)表达的检检,利用透射电镜进行诱导前后的细胞超微结构的观察。结果克隆来源细胞的STRO-1表达阳性。人牙髓干细胞经SHH因子体外诱导表现出成骨细胞特性,碱性磷酸酶和VonKossa染色结果均为阳性,RT-PCR检测成骨分化相关基因I型胶原(COL-I)仅诱导组有阳性表达。结论 SHH可以在体外有效诱导人DPSCs转化为成骨细胞。(本文来源于《世界最新医学信息文摘》期刊2019年18期）
体外诱导分化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:骨髓间充质干细胞作为中胚层来源的多能干细胞,除了能够分化为间充质系细胞如成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞外,还具有神经分化潜能,具有广阔的应用前景。目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的可行性。方法:选用健康SD大鼠,采用全骨髓贴壁法体外培养、纯化骨髓间充质干细胞,经流式细胞仪进行细胞表型鉴定。取生长状态良好的第4代骨髓间充质干细胞进行实验分组:对照组不加任何诱导剂;实验组培养液内加入胶质细胞源性营养因子,调整质量浓度分别为20,50,100μg/L,倒置相差显微镜连续观察细胞生长情况及形态变化。诱导6,12,24,48,72 h,采用免疫组化法检测巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶的表达。结果与结论:①原代提取获得的骨髓间充质干细胞形态均一性较好,流式细胞仪检测结果为CD44,CD90呈强阳性表达,CD34,CD45阳性表达率很低;②经胶质细胞源性营养因子诱导后,细胞胞体逐渐向胞核收缩,变形细胞逐渐增多,出现双极、多极和锥形等典型的神经元样细胞形态,细胞边缘出现突起,且与邻近细胞突起逐渐相互连接;③胶质细胞源性营养因子诱导6 h后出现巢蛋白表达阳性,24 h后达顶峰,50,100μg/L胶质细胞源性营养因子组巢蛋白表达显着高于20μg/L胶质细胞源性营养因子组。胶质细胞源性营养因子诱导12h后检测到神经元特异性烯醇化酶表达阳性,且表达强度随时间延长逐渐增加,48h后达顶峰,50,100μg/L胶质细胞源性营养因子组巢蛋白表达显着高于20μg/L胶质细胞源性营养因子组。对照组未见明显神经元样细胞的形态变化及特异性标志的阳性表达;④结果表明,大鼠骨髓间充质干细胞可通过全骨髓贴壁法在体外进行原代提取分离及传代培养,经胶质细胞源性营养因子诱导后具有向神经元样细胞分化的潜能。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
体外诱导分化论文参考文献
[1].刘洋,吕洋,王浩宇,李娇,任君旭.1,25-维生素-D_3体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的最适浓度[J].解剖学报.2019
[2].刘振东,王瑞,杨建东,王静成.胶质细胞源性神经营养因子体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化[J].中国组织工程研究.2019
[3].王姣杰,安慧娟,单泓,韩小改,别立莉.体外诱导外周血造血干细胞分化为成熟红细胞[J].中国组织工程研究.2019
[4].王晨宇,张曼玲,姜海滨,金永,赵丽华.猪naive-like胚胎干细胞向神经细胞体外诱导分化[J].南京医科大学学报(自然科学版).2019
[5].刘志强,李妍,杨小娟,李慧宁,韩远豪.骨髓基质细胞体外诱导小鼠肌源性干细胞造血分化初步研究[J].生物医学工程与临床.2019
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[7].潘倩,章建全,张传森.体外诱导骨髓间充质干细胞向甲状腺滤泡细胞分化的实验研究[J].中华细胞与干细胞杂志(电子版).2019
[8].张焕超.国产多孔钽对体外诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响[D].华北理工大学.2019
[9].马小草.金纳米粒子在体外诱导破骨细胞分化中的作用[D].山东大学.2019
[10].王建,杨清,徐卉,刘修信,冉建.SHH体外诱导人牙髓干细胞向成骨细胞分化的研究[J].世界最新医学信息文摘.2019
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