镰形棘豆生物碱成分研究及毒性评价

论文摘要

镰形棘豆（Oxytropis falcate Bunge）藏药中称为“达夏”,系豆科（Leguminosae）棘豆属（Oxytropis）多年生草本植物。具有广阔的药用开发前景。对于镰形棘豆的化学成分的报道较多,但对其毒性的研究则未见报道。本试验运用化学成分的系统预试和薄层色谱技术,初步确定镰形棘豆中化学成分种类。通过致突变试验、亚慢性毒性试验及生殖试验来对镰形棘豆的毒性进行研究和评价,以证明镰形棘豆具有跟疯草植物一样的毒性提供有力的论据,也为镰形棘豆药物的开发提供更加深入的资料。研究获得以下结果:1.镰形棘豆化学成分的预试验及生物碱薄层色谱分析利用系统预试和专项预试相结合对镰形棘豆所含的化学成分进行了预试验,结果表明镰形棘豆中含有酚类、鞣质、生物碱、黄酮及其苷类、糖、多糖及其苷类、氨基酸及多肽、皂甙、有机酸、甾体和三萜类物质、挥发油;不含蒽醌及其苷类、内酯、香豆素及其苷类、强心甙、氰甙及脂肪族硝基化合物。对镰形棘豆生物碱进行系统提取,通过选择适宜的展开系统对各萃取段生物碱薄层色谱分析,结果表明,镰形棘豆中主要是吲哚里西啶类生物碱,且以大极性成分为主,同时也含有少量的中、小极性生物碱。氯仿部分有6种生物碱,乙酸乙酯部分有11种生物碱,正丁醇部分有5种生物碱。经与苦马豆素标准品对照,镰形棘豆各萃取部分均含有苦马豆素,并从正丁醇部分分离得到28 mg苦马豆素,提取率0.00187%。2.镰形棘豆正丁醇提取物致突变试验选用苦马豆素含量最高的正丁醇萃取物,配制成800 mg/kg、1 000 mg/kg、2 000 mg/kg、4 000 mg/kg四个梯度的水溶液,运用骨髓微核试验与精子畸形试验进行致突变性评价,结果表明,镰形棘豆正丁醇萃取物引起小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核率分别为2.625‰、4.625‰、6.50‰和12.75‰;及精子畸形率为1.44%、1.99%、3.40%和3.475%;且存在剂量-效应关系,也就是说低浓度的时候对机体是安全的,剂量在2 000 mg/kg以下是安全范围,不引起微核及精子畸形发生率的升高;而高浓度时会引起突变发生率的显著升高,具有致突变性。3.镰形棘豆全草亚急性毒性试验通过给小鼠饲喂添加了镰形棘豆全草的饲料,对小鼠的临床症状观察,血液常规系数的检测,外周血T细胞及腹腔巨噬细胞吞噬功能的检查、内脏组织器官的剖检,研究镰形棘豆全草对小鼠的影响。结果表明,镰形棘豆全草对白细胞数及血红蛋白有一定的影响,而对红细胞、淋巴细胞的影响不显著。实验组小鼠的外周血T淋巴细胞ANAE阳性率分别为8.4%、15%和18.5%,与对照组比较差异显著（P<0.05）,而对巨噬细胞的非特异性吞噬功能的影响则是低含量有促进作用;而高含量则有抑制作用,试验组巨噬细胞吞噬指数分别为0.86、0.47和0.32。镰形棘豆全草还能使小鼠各种器官细胞出现空泡变性。4.镰形棘豆全草生殖毒性试验镰形棘豆全草饲料喂养小鼠进行三段生殖毒性试验,结果显示镰形棘豆对怀孕动物体增重的有着显著的影响,草粉含量越高怀孕动物体增重的差异越显著（P<0.05）,引起胚胎、骨骼和内脏畸形机率越大,说明了镰形棘豆与其它棘豆属疯草一样,具有损伤器官,使雄性动物减少甚至丧失性活动,致母畜流产,产弱胎、畸胎等生殖毒性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 镰形棘豆的研究进展
• 1.1 镰形棘豆（Oxytropis falcate Bunge）生物学特征
• 1.2 镰形棘豆分布及其危害
• 1.2.1 镰形棘豆分布
• 1.2.2 镰形棘豆的危害
• 1.3 镰形棘豆化学成分的研究进展
• 1.3.1 镰形棘豆中挥发油成分研究进展
• 1.3.2 镰形棘豆中黄酮类化合物研究进展
• 1.3.3 镰形棘豆中生物碱成分研究进展
• 1.4 镰形棘豆的药理作用
• 1.4.1 祛痰、抗炎作用
• 1.4.2 其他作用
• 1.5 镰形棘豆的制剂及其临床应用
• 1.6 小结
• 第二章 疯草主要生物碱的生物活性研究进展
• 2.1 疯草中生物碱的发现历程
• 2.2 疯草主要生物碱的存在形式和特性
• 2.2.1 生物碱在疯草中的存在形式
• 2.2.2 疯草中生物碱的特征
• 2.3 疯草生物碱的生物活性研究进展
• 2.3.1 疯草中吲哚里西啶类生物碱
• 2.3.2 疯草中喹诺里西啶类生物碱
• 2.4 小结
• 第三章 致突变性检测方法在毒理学评价中的应用概况
• 3.1 致突变作用
• 3.2 化学诱变原及作用原理
• 3.2.1 化学诱变物概述
• 3.2.2 常见诱变剂
• 3.2.3 诱变原的可能作用原理
• 3.3 致突变的检测方法
• 3.3.1 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验
• 3.3.2 SOS 显色试验
• 3.3.3 动物细胞的染色体畸变试验
• 3.3.4 微核试验
• 3.3.5 精子畸形试验
• 3.3.6 DNA 解螺旋荧光分析试验（FADU）
• 3.3.7 聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）分析
• 3.3.8 体细胞HPRT 基因位点突变频率的测定方法
• 3.4 致突变性检测方法的应用现状
• 3.4.1 致突变性检测方法的存在问题
• 3.4.2 致突变性检测方法的发展趋势
• 3.5 小结
• 第四章 镰形棘豆化学成分预试及生物碱成分薄层色谱分析
• 4.1 材料
• 4.1.1 植物样品
• 4.1.2 主要试剂
• 4.1.3 主要仪器
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 镰形棘豆化学成分系统预试验
• 4.2.2 镰形棘豆脂肪族硝基化合物专项预试
• 4.2.3 镰形棘豆生物碱的提取
• 4.2.4 镰形棘豆生物碱薄层层析检查
• 4.2.5 镰形棘豆正丁醇提取物中苦马豆素的分离（D101 大孔树脂法）
• 4.3 结果
• 4.3.1 镰形棘豆化学成分系统预试验结果
• 4.3.2 镰形棘豆脂肪族硝基化合物专项预试结果
• 4.3.3 镰形棘豆生物碱提取分离结果
• 4.3.4 镰形棘豆生物碱薄层层析检查结果
• 4.3.5 D101 大孔树脂法分离苦马豆素的结果
• 4.4 讨论
• 4.4.1 关于镰形棘豆生物碱的种类
• 4.4.2 关于镰形棘豆的毒性成分
• 4.4.3 关于D101 大孔树脂柱在SW 分离中的使用
• 4.5 小结
• 第五章 镰形棘豆正丁醇提取物对小鼠的致突变试验
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 植物材料
• 5.1.2 试剂和试验器材
• 5.1.3 试验动物
• 5.1.4 受试物的制备
• 5.1.5 微核试验
• 5.1.6 精子畸形试验
• 5.1.7 攻毒液中苦马豆素含量的气相色谱测定
• 5.1.8 统计分析
• 5.2 结果
• 5.2.1 微核试验
• 5.2.2 精子畸形试验
• 5.2.3 苦马豆素的含量
• 5.3 讨论
• 5.4 小结
• 第六章 镰形棘豆全草对小鼠的亚急性毒性试验
• 6.1 材料及仪器
• 6.1.1 材料
• 6.1.2 主要仪器
• 6.1.3 主要试剂
• 6.2 方法
• 6.2.1 攻毒饲料的制作
• 6.2.2 试验动物分组及处理
• 6.2.3 外周血T 淋巴细胞ANAE 染色法
• 6.2.4 巨噬细胞非特异免疫功能检查
• 6.3 结果
• 6.3.1 临床症状的观察
• 6.3.2 试验期间小鼠的体重变化
• 6.3.3 血常规检查
• 6.3.4 外周血T 淋巴细胞的检查
• 6.3.5 巨噬细胞非特异免疫功能检查
• 6.3.6 眼观病理变化
• 6.3.7 病理组织学检查
• 6.4 讨论
• 6.5 小结
• 第七章 镰形棘豆全草对小鼠生殖毒性试验
• 7.1 材料与方法
• 7.1.1 试验材料与器材
• 7.1.2 动物的分组与处理
• 7.2 结果
• 7.2.1 镰形棘豆全草对孕鼠及其胚胎发育的影响
• 7.2.2 镰形棘豆全草对胎鼠内脏、骨骼的影响
• 7.3 讨论
• 7.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介