籽鹅卵巢组织6个产蛋性能相关基因的研究

论文摘要

为探讨籽鹅产蛋性能相关的候选基因及进一步对产蛋性状进行标记辅助选择,本试验选取了籽鹅卵巢组织中6个产蛋性能相关基因进行研究。试验材料为产蛋前期5月龄和产蛋期8月龄的籽鹅卵巢组织。采用Trizol提取法分别获得两个月龄卵巢中总RNA,反转录获得cDNA, RT-PCR方法分别扩增出6个基因的表达序列标签目的片段。首先,使用SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,检测籽鹅卵巢组织中6个基因EST1～EST6 mRNA在产蛋前期和产蛋期的表达水平。然后,设计EST2-EST6的特异性引物,使用RT-PCR方法分别对5个基因进行部分长度片段克隆,测序获得核苷酸片段材料,使用分子生物学相关软件,进行生物信息学分析。最后,使用RACE技术扩增获得籽鹅α-烯醇化酶蛋白基因（本文中的EST1）的全长cDNA序列,并应用分子生物学相关软件进行基因功能的预测和初步鉴定。结果如下：1.实时荧光定量PCR检测结果显示,产蛋期8月龄籽鹅卵巢中EST1、EST2、EST4、EST5和EST6基因的表达水平明显高于产蛋前期（P＜0.05）；EST3在产蛋期的相对表达量是产蛋前期的4.32倍,二者差异极显著（P＜0.01）2. RT-PCR方法克隆得到籽鹅卵巢组织中产蛋性能相关基因EST2-EST6的核苷酸片段分别长为364bp、476bp、901bp、908bp和1168bp,分别对EST2-EST6进行核苷酸同源性对比和生物信息学分析研究,获得了克隆全长基因的基础材料。3.在试验中应用RACE技术在籽鹅卵巢组织中获得了籽鹅α-烯醇化酶蛋白基因的全长cDNA序列,生物信息学分析显示：该序列包含完整的开放阅读框（ORF）, ORF序列长度为1305bp,起始密码子在28位,终止密码子在1332位,该基因编码的蛋白含有434个氨基酸残基,5到416氨基酸之间含有Enolase （cd03313）保守结构域,定位于细胞质内,属于细胞质内蛋白类,该蛋白含有一个信号肽切割位点（定位于20～21位氨基酸残基之间）,并含有2个跨膜内螺旋和1个跨膜外螺旋。试验获得的信息为籽鹅α-烯醇化酶蛋白基因功能的鉴定和与产蛋性能相关生理机能的深入研究奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 籽鹅品种简介
• 1.2 鹅产蛋性能相关基因的研究
• 1.3 抑制性消减技术在筛选生产性能相关基因上的应用
• 1.4 荧光定量检测技术在研究产蛋性能相关基因上的应用
• 1.5 RACE技术在获得全长cDNA及研究基因功能上的应用
• 1.6 本试验的目的和意义
• 第二章 籽鹅卵巢组织6个差异表达基因的实时荧光定量检测
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第三章 籽鹅5个产蛋性能相关基因克隆与分析
• 3.1 试验材料
• 3.2 试验方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 第四章 籽鹅A-烯醇化酶蛋白基因RACE技术克隆及功能分析
• 4.1 试验材料
• 4.2 试验方法
• 4.3 结果
• 4.4 讨论
• 4.5 小结
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 个人简历