幽门螺杆菌CagA～+菌株对胃上皮细胞间隙连接影响的实验和临床研究

论文摘要

第一部分幽门螺杆菌对胃上皮细胞间隙连接影响的实验研究目的观察体外实验中CagA+H．pylori菌株对胃上皮细胞Cx32、Cx43表达、细胞增殖和细胞间隙连接超微结构的影响，及抗H．pylori药物干预后的变化，探讨CagA+ H．pylori菌株与胃上皮细胞间隙连接超微结构、Cx表达的关系。方法不同菌型H．pylori与BGC-823细胞按细菌／细胞比例20∶1、100∶1、500∶1共培养24h、48h，及细菌／细胞比例100∶1共培养16h后予抗H．pylori药物干预；对照组不加H．pylori或不加药物。用细胞免疫化学SABC法及计算机图像分析技术，检测细胞Cx32、Cx43表达变化；四唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况；原位固定与原位包埋法透射电镜及扫描电镜观察细胞间隙连接超微结构变化。结果（1）Cx32、Cx43表达变化：Cx32在BGC-823细胞均为阴性表达。Cx43表达在未加H．pylori的对照组48h高于24h；NCTC J99不同比例组48h均低于24h，且低于对照组，24h及48h 500∶1组均低于100∶1组和20∶1组，48h 100∶1组低于20∶1组（p＜0.05）；而NCTC 12908不同比例组48h与24h比较差异无统计学意义（p＞0.05），24h 100∶1组和500∶1组均低于对照组，24h及48h 500∶1组低于20∶1组（p＜0.05）；三联抗H．pylori药物干预后48h Cx43表达增强。（2）细胞增殖情况：NCTC J99培养24h，100∶1组细胞增殖增强；培养48h，20∶1组和100∶1组细胞增殖增强，500∶1组细胞增殖受到抑制（p＜0.05）；而NCTC 12908对细胞增殖无明显影响。抗H．pylori药物干预对细胞增殖有抑制作用。（3）细胞间隙连接超微结构变化：未加H．pylori的对照组可见较多细胞连接及连接复合体，加各型H．pylori菌株后细胞间隙增宽，细胞连接数目减少或缺失，细胞连接长度缩短，未见连接复合体形成。CagA+的NCTC J99组、临床株GC 01组和NCTC 11639组细胞连接数、单位周长连接数均小于CagA-的NCTC 12908组（p＜0.001或p＜0.05），且NCTC J99组与临床株GC 01组细胞单位周长连接长度短于NCTC 12908组（p＜0.001），表明CagA+菌株对细胞间隙连接的影响大于CagA-菌株；三联抗H．pylori药物能杀灭H．pylori，使细胞相互靠近，促进细胞间隙连接形成。结论（1）CagA+H．pylori下调BGC-823细胞Cx43表达，随H．pylori密度增加和共培养时间延长，Cx43表达下调越明显；CagA-H．pylori对Cx43表达的影响不如CagA+菌株明显。（2）CagA+H．pylori低密度时促进细胞增殖，高密度时抑制细胞增殖；CagA-H．pylori对细胞增殖无明显影响。提示H．pylori对胃上皮细胞的促增殖作用可能与其毒力因子CagA有关。（3）CagA+H．pylori菌株对细胞连接数目、连接长度的影响大于CagA-菌株，提示细胞间隙连接改变与CagA+H．pylori菌株更密切。（4）三联抗H．pylori药物干预可上调Cx43表达，抑制细胞增殖，改善H．pylori对细胞间隙连接的影响，促进细胞间隙连接形成。第二部分幽门螺杆菌对胃上皮细胞间隙连接影响的临床研究目的观察胃癌（GC）和癌前病变（PL）患者Cx32、Cx43表达和细胞间隙连接超微结构改变，及PL患者H．pylori根除后的变化，探讨其与H．pylori感染特别是CagA+H．pylori感染的关系。方法选取70例GC、88例PL、33例慢性浅表性胃炎（CS6）患者，用组织免疫化学SABC法检测胃粘膜活检标本Cx32、Cx43表达，透射电镜观察细胞间隙连接超微结构改变。H．pylori感染者用PCR法行CagA基因检测。H．pylori感染PL患者行三联抗H．pylori治疗后观察H．pylori根除情况及上述指标变化。结果（1）Cx32、Cx43表达情况：GC组Cx32、Cx43表达阳性率分别为15.7％与32.9％，PL组分别为51.1％与54.5％，均低于CSG组（分别为100％与93.9％，p＜0.05）；GC组低于PL组，并与胃癌分化程度有关，PL组与PL类型有关。PL患者H．pylori阳性组Cx32、Cx43表达阳性率和表达强度低于H．pylori阴性组；GC患者H．pylori阳性组Cx32表达阳性率为16.7％，与阴性组比较差异无统计学意义（13.6％，p＞0.05）；Cx43表达阳性率为25％，低于H．pylori阴性组（50％，p＜0.05）。H．pylori感染CSG患者CagA+组与CagA-组Cx32、Cx43表达阳性率均为100％，但CagA+组Cx43表达强度低于CagA-组（p＜0.05）。H．pylori感染GC患者CagA+组Cx32表达阳性率为12.8％，与CagA-组比较差异无统计学意义（33.3％，p＞0.05）；Cx43表达阳性率为17.9％，低于CagA-组（55.6％，p＜0.05）。H．pylori阳性PL患者抗H．pylori治疗后H．pylori根除者Cx32、Cx43表达阳性率和表达强度均高于治疗前（p＜0.05），而H．pylori未根除者与治疗前比较差异无统计学意义（p＞0.05）。（2）PL患者胃上皮细胞单位周长连接长度小于CSG患者，细胞间隙最小宽度大于CSG患者。GC患者细胞连接数、单位周长连接数与单位周长连接长度小于CSG与PL患者，细胞间隙最小宽度大于CSG；CagA+H．pylori感染者细胞连接数、单位周长连接数与单位周长连接长度均小于CagA-H．pylori感染者，细胞间隙最小宽度大于CagA-H．pylori感染者。PL患者H．pylori根除者胃粘膜上皮细胞间隙缩小，细胞连接长度增加，其单位周长连接长度大于未根除者，细胞间隙最小宽度小于未根除者。结论（1）GC和PL患者Cx32、Cx43表达阳性率和表达强度均降低，并与GC分化程度及PL类型有关。（2）GC和PL患者胃上皮细胞间隙宽，细胞连接数目少，连接长度短。（3）GC和PL患者Cx32、Cx43表达和胃上皮细胞间隙连接改变与H．pylori感染有关。（4）GC患者CagA+H．pylori感染者细胞间隙连接改变大于CaaA-H．pylori感染者，提示GC患者细胞间隙连接改变与CagA+H．pylori感染更密切。（5）H．pylori根除可上调PL患者Cx32、Cx43表达，缩小上皮细胞间隙，增加细胞连接长度。提示H．pylori根除可能促进细胞间隙连接形成，提高GJIC功能，延缓或阻止PL的进展，防止GC的发生。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩写词
• 第一章 幽门螺杆菌对胃上皮细胞间隙连接影响的实验研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验仪器
• 2.3 方法
• 3 结果
• 3.1 Cx32、Cx43表达变化
• 3.2 细胞增殖变化
• 3.3 细胞间隙连接超微结构变化
• 4 讨论
• 4.1 H.pylori对胃上皮细胞CX表达的影响
• 4.2 H.pylori对胃上皮细胞增殖的影响
• 4.3 H.pylori对细胞连接的影响
• 5 结论
• 参考文献
• 第二章 幽门螺杆菌对胃上皮细胞间隙连接影响的临床研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 研究对象
• 2.2 研究方法与实验材料
• 2.3 统计方法
• 3 结果
• + H.pylori感染率'>3.1 CagA⁺H.pylori感染率
• 3.2 Cx32、Cx43表达变化
• 3.3 细胞间隙连接超微结构变化
• 4 讨论
• +H.pylori感染与胃癌和癌前病变的关系'>4.1 H.pylori感染、CagA⁺H.pylori感染与胃癌和癌前病变的关系
• 4.2 胃癌和癌前病变患者Cx32、Cx43表达与细胞间隙连接改变
• 6H.pylori感染的关系'>4.3 Cx32、Cx43表达及细胞间隙连接改变与CagA⁶H.pylori感染的关系
• 4.4 抗H.pylori治疗对胃癌前病变Cx32、Cx43表达及细胞间隙连接的影响
• 4.5 研究展望
• 5 结论
• 参考文献
• 第三章 幽门螺杆菌CagA与胃癌研究进展（综述一）
• 第四章 细胞间隙连接通讯与胃癌研究进展（综述二）
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果