肿瘤坏死因子信号传导及其旁路在小鼠肝癌细胞凋亡过程中作用及其机制的研究

论文摘要

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）信号传导通路及其旁路蛋白激酶Cα（PKC-α）在小鼠肝癌细胞（H22）凋亡过程中的作用及其机制。方法：不同浓度的TNF-α作用于H22细胞后于不同时间流式细胞仪测定细胞的凋亡，westernblot检测细胞内PKC-α、磷酸化-PKC-α（p-PKC-α）、c-Jun N-未端激酶（JNK）、p-JNK、p-P38和caspase-8蛋白的表达。TNF-α作用于H22细胞过程中，分别以sp600125抑制JNK，SB203580抑制P38，G（?）6976抑制或佛波脂（TPA）激活PKC-α活性并检测细胞凋亡和细胞内蛋白的表达，免疫荧光显微镜检测细胞内p-JNK的表达，共聚焦显微镜检测细胞内p-PKC-α的表达及其细胞内移位情况，电泳迁移率变动分析（EMSA）检测细胞内核因子κB（NF-κB）与DNA探针的结合活性，以探讨这些蛋白间的调节作用以及与TNF-α诱导H22细胞凋亡的关系。并以TNF-α联合G（?）6976治疗小鼠肝癌腹水瘤，观察小鼠腹水内肿瘤细胞的坏死及小鼠生存时间。结果：不同浓度的TNF-α作用于H22细胞后，PKC-α、p-PKC-α、JNK、p-JNK、p-P38、caspase-8的表达和细胞凋亡率均随TNF-α浓度升高，作用时间延长而增加。以sp600125抑制JNK或SB203580抑制P38活性，则PKC-α、p-PKC-α表达上调而JNK、p-JNK、p-P38、caspase-8等表达下调，NF-κB与DNA结合活性增加，同时细胞凋亡率下降；免疫荧光显示，p-JNK分布于胞浆胞核且表达下调。以G（?）6976抑制PKC-α活性后，p-JNK，caspase-8表达上调，NF-κB结合活性减弱，细胞对TNF-α敏感性增加。相反，如同时TPA激活PKC-α，则p-JNK，caspase-8表达下调，共聚焦下p-PKC-α表达显著增强，分布于胞浆胞核，NF-κB与DNA探针结合活性显著增加。TNF-α联合G（?）6976治疗小鼠肝癌腹水瘤，腹水内坏死肿瘤细胞较TNF-α治疗组和对照组均显著增加，小鼠生存时间也明显延长。结论：TNF-α作用于H22细胞的信号传导过程中，TNF-α可显著上调JNK、p-JNK、PKC-α、p-PKC-α、p-P38、及caspase-8的表达和NF-κB与DNA探针的结合活性；JNK，P38表达与活化促进细胞凋亡，而PKC-α，NF-κB的表达与活化抑制细胞凋亡。PKC-α抗凋亡作用是通过增加NF-κB活性来实现的，PKC-α抑制剂G（?）6976，可以显著提高，TNF-α对H22细胞的细胞毒性，TNF-α联合G（?）6976治疗小鼠肝癌腹水瘤可以显著延长小鼠的生存时。

论文目录

• 前言
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文
• 第一部分 c-Jun,JNK,P38在TNF-α诱导小鼠肝癌细胞凋亡中作用的实验研究
• 第二部分 抑制PKC-α活性增加TNF-α对小鼠肝癌细胞毒性的实验研究
• 第三部分 TNF-α诱导小鼠肝癌细胞（H22）凋亡的信号传导过程中PKC-α抗凋亡机制的探讨
• 第四部分 TNF-α联合G（o|¨）6976治疗小鼠肝癌腹水瘤的动物实验研究
• 综述
• 综述一 肿瘤坏死因子信号传导及其旁路研究进展
• 综述二 JNK在细胞凋亡过程中作用研究进展
• 附录
• 附录1 常用试剂配制
• 附录2 实验步骤
• 附录3 发表论文题录
• 致谢