电针对脑缺血再灌注大鼠海马细胞因子介导凋亡信号转导机制的研究

论文题目: 电针对脑缺血再灌注大鼠海马细胞因子介导凋亡信号转导机制的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 针灸推拿学

作者: 孔立红

导师: 孙国杰

关键词: 脑缺血再灌注,电针,海马组织,细胞因子,转录因子,凋亡,信号转导机制

文献来源: 湖北中医学院

发表年度: 2005

论文摘要: 目的缺血性脑卒中发病率随社会老年化的出现而升高,并有逐年年轻化的倾向,其高发病率、死亡率、致残率严重危害人类健康。凋亡是缺血半暗带神经细胞死亡的主要形式,抑制神经细胞凋亡可以减轻缺血半暗带的损伤,挽救濒死神经细胞,改善缺血性中风的预后。因此,有效地减轻脑梗死后神经细胞凋亡的发生发展是脑血管病研究的重点和突破点所在。针刺对缺血性脑损伤具有多水平、多通道、多靶点的保护和干预作用。本课题在以督脉穴为主治疗脑血管病的临床和实验的基础上,以神经细胞凋亡为观察的目的点,以细胞因子介导的信号转导为研究的切入点,从对缺血较敏感海马CA1区的病理改变、神经细胞凋亡、信息分子等三个层次系统,研究针刺对缺血性脑卒中的脑保护作用和可能机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型24h组、模型48h组、模型72h组、电针治疗24h组、电针治疗48h组、电针治疗72h组。采用大脑中动脉线栓法制备（middle cerebral artery occlusion, MCAO）缺血再灌模型,电针“大椎”、双侧“内关”穴。运用TUNEL法检测大鼠海马CA1区神经细胞凋亡数量的变化;HE染色观察大鼠海马组织显微结构的病理变化;运用放射免疫法检测大鼠海马组织中细胞因子TNF-α和IL-6含量的变化;运用免疫组化学法检测大鼠海马CA1区,转录因子NF-κB和STAT3,基因Bcl-2和Fas蛋白水平变化;运用蛋白免疫印迹法观察各组大鼠海马组织NF-κB和STAT3蛋白含量的变化,以及电针对上述指标的影响。结果（1）电针可明显改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能缺损（P<0.05,P<0.01）;可明显减少脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马CA1区神经细胞凋亡数,以72h电针治疗组尤为明显（P<0.01或P<0.05）;可有效改善脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马组织病理学改变。（2）模型各组大鼠缺血侧海马组织TNF-α,IL-6含量明显升高,与正常组,假手术组比较有显著性差异（P<0.05）;TNF-α在24h出现高峰,IL-6在48h出现高峰;电针治疗后TNF-α含量逐渐回落,与模型组同时相比较有显著意义（P<0.05）,并随时间的推移逐渐趋于正常。电针治疗后IL-6含量更明显升高,与模型组同时相比较有显著意义（P<0.05）。（3）模型各组大鼠缺血侧海马CA1区NF-κB-p65蛋白表达和海马组织NF-κB-p65蛋白含量显著高于针刺同时相各组（P<0.01,P<0.05）,48h小时达高峰,NF-κB移位于核明显;模型组大鼠缺血侧海马CA1区NF-κB-p65蛋白表达显著高于正常组和假手术组（P<0.05）。（4）电针治疗各组大鼠缺血侧海马CA1区STAT3蛋白表达和海马组织STAT3博士学位论文电针对脑缺血再灌注大鼠海马细胞因子介导凋亡信号转导机制的研究含量显著高于同时相模型各组（P<0.05,P<0.01）,72h其含量达高峰,同时STAT3明显移位与核;模型组大鼠缺血侧海马CAI区STAT3蛋白表达显著高于正常组,假手术组（P<仓05）。（5）模型各组大鼠缺血侧海马CAI区Bd一2蛋白表达显著低于同时相电针治疗各组（P<0.01）,24小时达高峰;与正常组,假手术组相比较有显著性差异（P<0.01）;模型各组大鼠缺血侧海马CAI区Fas蛋白表达显著高于同时相电针治疗各组（P<0.01）,且在48小时达高峰,与正常组,假手术组相比较有显著性差异（P<0.01）o结论NF一虑,STAT3,TNF一a,几一6,Bd一2,Fas参与了脑缺血再灌损伤神经细胞凋亡的发生。电针对缺血性脑损伤再灌注炎性细胞因子介导凋亡的信号转导具有良性调节作用,这一作用可能是通过以下途径实现的:上调STAT3蛋白含量和表达,促进其核转位,下调NF一虑蛋白表达,阻滞其核转位;同时升高其上游细胞因子一几一6的含量,降低其上游细胞因子一TNF一a的含量;激活其下游抗凋亡基因Bcl一2的表达,抑制其下游促凋亡基因Fas的表达。从多靶点,多环节纠正了信号转导机制的紊乱。从而减少和阻止易损海马CAI区神经细胞凋亡的发生发展,病理的改变,改善缺血性卒中病的预后。主题词:脑缺血再灌注/电针信号转导机制海马组织细胞因子转录因子凋亡

论文目录:

中文摘要

英文摘要

缩略词表

前言

实验研究

实验一电针对脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤的保护作用

实验二电针对脑缺血再灌注大鼠海马炎性细胞因子TNF-α、IL-6含量的影响

实验三电针对脑缺血再灌注大鼠海马组织NF-κB表达及含量的影响

实验四电针对脑缺血再灌注大鼠海马组织STAT_3表达及含量的影响

实验五电针对脑缺血再灌注后大鼠海马组织Bcl-2和Fas蛋白表达的影响

讨论和结论

一中医对脑梗死疾病的认识

二电针大椎、内关穴治疗缺血性中风的理论依据

三信号转导与中医经络的关系

四脑缺血再灌注损伤后炎性细胞因子与细胞凋亡的关系

五电针对脑缺血再灌损伤后细胞因子介导凋亡信号转导机制的影响

六问题及展望

本课题创新点

文献综述

综述一脑缺血再灌注后神经元损伤机制的研究进展

综述二针刺对脑缺血再灌注损伤保护作用的研究进展

致谢

发布时间: 2005-06-22

参考文献

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