论文题目: 转BMP7基因组织工程软骨的构建与移植修复兔膝关节软骨缺损
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物化学与分子生物学
作者: 曲福军
导师: 侯立中
关键词: 组织工程软骨,基因治疗,骨形成蛋白,软骨移植,基因转染
文献来源: 吉林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 采用RT-PCR 技术从体外培养的幼兔膝关节软骨细胞中克隆得到BMP7 基因;并将该基因克隆入pcDNA3.1 真核表达载体,构建了重组pcDNA3.1-BMP7质粒;在脂质体介导下将该重组质粒转染入成年兔关节软骨细胞,通过实验证明了BMP7 基因在软骨细胞中表达BMP7mRNA 和BMP7 蛋白。应用转BMP7 基因软骨细胞,以胶原-纤维蛋白凝胶为支架构建了转BMP7基因组织工程软骨。转BMP7 基因组织工程软骨中细胞分裂、增殖速度快,细胞器发达,细胞外基质合成增多,DNA 与GAG 含量增高,BMP7 基因表达的目的蛋白具有生物活性。分析了与其同步构建的未转BMP7 基因组织工程软骨的生物学差别。确定了转BMP7 基因组织工程软骨的移植修复时间。通过组织工程和基因工程技术相结合,将构建的转BMP7 基因组织工程软骨移植到模型动物兔膝关节软骨缺损处,BMP7 基因能在移植部位表达活性BMP7 蛋白,加速了关节软骨缺损的修复。开创了转基因组织工程软骨促进关节软骨缺损修复的新领域。为其应用于临床奠定了基础。
论文目录:
第一篇 文献综述
第一章 软骨组织工程研究
一、组织工程学的概念
(一)、组织工程学基本原理
(二)、组织再生
(三)、器官替代物
二、软骨组织工程
(一)、软骨组织工程的种子细胞
1. 自体细胞
2. 同种异体细胞
3. 骨随间质干细胞(MSCs)
4. 胚胎干细胞(ES)
(二)、生物材料载体
1. 人工化学合成降解材料
2. 天然生物材料
(三)、细胞因子的作用
(四)、组织工程人工软骨的构建与细胞培养
(五)、组织工程软骨的生物学评价
三、关节软骨损伤的修复
(一)、软骨移植修复
(二)、软骨细胞移植修复
1. 自体软骨细胞移植修复
2. 异体软骨细胞移植修复
(三)、组织工程技术修复软骨缺损
(四)、基因治疗与软骨缺损修复
四、组织工程软骨的临床应用
(一)、自体软骨细胞移植加上骨膜或筋膜覆盖
(二)、胶原复合自体软骨细胞移植(MCI)
(三)、透明脂酸钠复合自体软骨细胞移植(Hyalograft C)
第二章 BMP 在软骨损伤愈合中的应用
一、基因治疗的概念
二、基因治疗的策略
(一)、部位和时间
(二)、基因转移方法
(三)、载体
1. 病毒载体
2. 非病毒载体
三、BMP 的骨及软骨诱导作用
(一)、BMPs 的种类和结构特征
1.B MPs 的种类
2.B MPs 的结构特征
(二)、BMPs 的生物活性及其骨形成的生理作用
(三)、BMPs 的作用机制
(四)、BMPs 受体和信号转导机制
1.B MPsⅠ、Ⅱ型受体的种类
2.B MPs 受体的生物学特征
3.B MPs 受体的信号传导机制
(五) 、BMPs 生物活性的影响因素
1.B MPs 的浓度
2. 细胞外基质
3. 激素和生长因子
四、BMPs 的分离与提纯
五、BMPs 基因治疗的技术路线和研究进展
(一) 、BMPs 基因治疗的技术路线
(二) 、BMPs 基因治疗的研究进展
1. Ex vivo 基因治疗
2. In vivo 基因治疗
六、BMPs 的临床应用
七、BMPs 基因治疗展望
第二篇 重组pcDNA3.1-BMP7质粒的构建及其在软骨细胞中的表达
第一章 重组pcDNA3.1-BMP7 真核表达载体质粒的构建与鉴定
材料与方法
1. 材料
2. 实验方法
实验结果
1. 家兔关节软骨细胞的分离与培养
2. 总 RNA 的提取及 RT-PCR
3. T-BMP7 克隆载体的构建及鉴定
4. pBlue-BMP7 载体质粒的构建及鉴定
5. pcDNA3.1-BMP7 载体质粒的构建与鉴定
讨论
1. 家兔膝关节软骨细胞的分离与培养
2. 软骨细胞中 BMP-7 基因全长序列的克隆
3. 重组pcDNA3.1-BMP7 真核表达载体质粒的构建与鉴定
第二章 重组pcDNA3.1-BMP7质粒转染兔关节软骨细胞及其在该细胞中的表达
材料与方法
1. 材料
2. 实验方法
实验结果
1. 脂质体介导pcDNA3.1-BMP7 质粒转染家兔关节软骨细胞
2. 重组pcDNA3.1-BMP7 质粒在软骨细胞中的表达
讨论
1. 目的基因
2. 载体
3. 受体细胞
4. 软骨细胞的转染与表达
结论
第三编 应用转 BMP7 基因软骨细胞构建组织工程软骨及其对兔膝关节软骨缺损的修复
第一章 应用转BMP7基因软骨细胞构建组织工程软骨
材料与方法
1. 材料
2. 实验方法
实验结果
1. 组织工程软骨培养物倒置显微镜观察
2. 组织工程软骨培养物组织学观察
3. 组织工程软骨培养物超微结构观察
4. 生物化学分析
5. 转基因组织工程软骨培养物 BMP7 的表达
讨论
1. 转基因组织工程软骨
2. 组织工程软骨的组织学、生物化学及超微结构
3. 组织工程软骨培养物 BMP7 基因的表达
第二章 转BMP7基因组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损
材料与方法
1. 材料
2. 实验方法
实验结果
1. 转BMP7 基因组织工程软骨对家兔膝关节缺损移植修复
2. BMP7 基因在兔膝关节软骨缺损移植修复中的表达
讨论
1. 组织工程软骨的移植时期
2. 转BMP7 基因组织工程软骨的移植部位及缺损大小的选择
3. 转BMP7 基因组织工程软骨对关节软骨缺损的移植修复
结论
参考文献
发表论文
致谢
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英文摘要
发布时间: 2005-08-26
参考文献
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