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石斑鱼病毒性神经坏死病研究

2020-11-23阅读(973)

石斑鱼病毒性神经坏死病研究

论文摘要

应用流行病学调查方法,对福建南部地区海水养殖石斑鱼近年来日益严重的暴发性传染病进行调查和研究。首次阐明了该地区养殖石斑鱼传染病的主要种类及其流行病学特征,病毒性神经坏死病（viral nervous necrosis,VNN）是该地区最常见、危害也最大的传染病,常导致大批石斑鱼鱼苗和幼体发病死亡。该传染病具有典型的神经症状,游动异常,中枢神经和视网膜组织出现空泡坏死病变。病鱼除了神经异常外,无其它临床病症,体表及体内也无明显的病理变化或寄生虫寄生。该病通过鱼卵行垂直传播,也可经养殖水体行水平传播。来自受感染亲鱼的垂直传播是鱼苗感染的主要途径。各种石斑鱼以及不同日龄的石斑鱼均易感,但对幼体的危害更严重。该病具有明显的季节性,通常每年的4-8月份为发病高峰期。从发病的石斑鱼分离出溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）、副溶血弧菌（ V. parahaemolyticus）和河流弧菌（V. fluvialis）等10株病原菌,大多为继发感染的条件致病菌,加剧了病情,导致更多石斑鱼死亡。匹里虫（Pleistophora）和本尼登虫（Benedenia）是石斑鱼最常见的寄生虫,由于这些虫的寄生导致石斑鱼免疫力和抵抗力降低,容易引发其它传染性病原的感染。在国内首次建立了逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测鱼类神经坏死病毒（NNV）的检测操作规程,并应用到传染病调查和厦门口岸进出境鱼类病害检疫中。同时,用组织切片法对石斑鱼脑部和视网膜的特征性病变进行验证,证明该方法是一种快速、简便、准确的检测方法。应用该方法对厦门地区网箱养殖的鞍带石斑鱼（Epinephelus lanceolatus）、点带石斑鱼（E. malabaricus）、青石斑鱼（E. awoara）、赤点石斑鱼（E. akaara ）和云纹石斑鱼（E. moara）等5种石斑鱼共100多份样品进行检测,NNV平均检出率约90%。对上述5种石斑鱼的NNV PCR扩增产物进行核酸测序和同源性比较,同源性超过99%,与基因库中其它石斑鱼的NNV的同源性也大于97%。石

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 绪论
  • 第一节 养殖石斑鱼的主要病原及其危害
  • 一、病毒性传染病
  • 二、细菌性传染病
  • 三、寄生虫病
  • 四、其它病因
  • 五、病害的防治
  • 第二节 鱼类病毒性神经坏死病研究进展
  • 一、鱼类神经坏死病毒的种类和地理分布
  • 二、鱼类神经坏死病毒的分子结构和理化特性
  • 三、鱼类神经坏死病毒的危害
  • 四、神经坏死病毒的传播途径
  • 五、神经坏死病毒的检测方法
  • 六、病毒性神经坏死病的防治
  • 第二章 福建南部养殖石斑鱼神经坏死病流行病学调查
  • 前言
  • 第一节 养殖石斑鱼病害流行情况
  • 一、材料与方法
  • 二、结果
  • 1. 流行病学特点
  • 2. 病原学调查结果
  • 三、讨论
  • 第二节 神经坏死病毒的确认及其组织病理学观察
  • 一、材料与方法
  • 二、结果
  • 1.VNN 的 RT-PCR 检测结果
  • 2. RSIV 的 PCR 检测结果
  • 3. 组织病理学观察结果
  • 三、讨论
  • 小结
  • 第三章 RT-PCR 检测石斑鱼神经坏死病毒方法的建立和应用
  • 前言
  • 第一节 RT-PCR 检测石斑鱼神经坏死病毒方法的建立
  • 一、材料和方法
  • 二、结果
  • 1. 核酸抽提结果比较
  • 2. cDNA 结果比较
  • 3. 一步法 RT-PCR 扩增结果
  • 三、讨论
  • 第二节 RT-PCR 方法检测5 种养殖石斑鱼 NNV
  • 一、材料和方法
  • 二、结果
  • 1. RT-PCR 检测结果
  • 2. 扩增产物的序列测定和比较
  • 三、讨论
  • 小结
  • 第四章 荧光定量 RT-PCR 法检测石斑鱼神经坏死病毒
  • 前言
  • 一、材料与方法
  • 二、结果
  • 1. 阳性控制品的克隆及鉴定
  • 2. 标准曲线的建立
  • 2+浓度的优化'>3. Mg2+浓度的优化
  • 4. 退火温度的选择
  • 5. 石斑鱼NNV 的检测结果
  • 三、讨论
  • 小结
  • 第五章 鞍带石斑鱼神经坏死病毒 RNA1 和 RNA2 基因组序列测定和分析
  • 前言
  • 第一节 鞍带石斑鱼 NNV 的 RNA1 和 RNA2 基因组序列测定
  • 一、材料与方法
  • 二、结果
  • 1. RT-PCR 结果
  • 2. 鞍带石斑鱼 NNV 核苷酸序列检测结果
  • 3. DGNNV 的 RNAs 二级结构预测
  • 4. 在基因库中的编号
  • 三、讨论
  • 第二节 鞍带石斑鱼神经坏死病毒（DGNNV）基因组分析
  • 一、材料与方法
  • 二、结果
  • 1. 核苷酸同源性比较
  • 2. 氨基酸序列比较
  • 3. 非编码区（non-coded region,NCR）基因序列比较
  • 4. 系统发育进化分析
  • 三、讨论
  • 小结
  • 图版
  • 参考文献
  • 缩略词
  • 在学期间已取得的成果和发表的论文
  • 一.科研成果
  • 二.主持科研课题
  • 三.论文
  • 致谢

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